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Flt3配体(FL)文献资料
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分泌人可溶性FL基因转染细胞及其生物学活性分析
应用基因重组技术构建了人可溶性FL基因逆转录病毒载体pLXSN-FL,经转染PA317细胞和G418筛选抗性细胞克隆,获得重组病毒液.NIH3T3细胞进行病毒滴度测定后,选择适当滴度的重组病毒(5×105CFU/m1)感染ECV304细胞;应用聚合酶链反应(PCR)及反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测感染ECV304细胞FL的DNA及mRNA表达;应用ELISA测定rhFL在ECV304中的表达水平,用荧光标记和流式细胞仪检测转基因上清对单个核细胞来源DC的表型影响及3H-TdR掺人法测定DC对T细胞的促增殖作用.结果表明,外源性rhFL基因整合到ECV304细胞染色体DNA并有效地转录和翻译,稳定表达水平为82.4ng(106细胞/24 h)的人FL.转基因ECV细胞培养上清能有效诱导人PBMC来源DC的分化和增强DC对T细胞的激发作用.外源性FL基因可以转移到ECV304细胞并稳定表达,有助于体外研究内皮细胞与免疫细胞的相互作用.
关键词： Flt3配体(FL) 逆转录病毒载体 ECV304细胞
