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昆虫杆状病毒表达文献资料
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抗癌胚抗原单链抗体基因与Mn-SOD基因的融合及在昆虫细胞中的表达
将抗癌胚抗原单链抗体基因与锰-超氧化物歧化酶基因融合(ScFv-Mn-SOD)插入昆虫杆状病毒供体质粒pFastBacHTb中,经大肠杆菌DH10Bac体内转座,产生重组杆状病毒pBacHTb-Mn-SOD-ScFv.将其转染粉纹夜蛾Tn-5B1-4细胞,经扩增后在细胞内进行表达.SDS-PAGE分析结果表明,融合基因得到高效表达,其表达产物相对分子质量为40 000单体和160 000左右的四聚体.Western印迹分析结果,以6×His单克隆抗体为一抗进行蛋白印迹在相对分子质量40 000单体和160 000四聚体处可见表达条带,放射免疫分析表明重组杆状病毒表达ScFv-Mn-SOD融合蛋白能与CEA有较高的结合力,并且此融合蛋白具有特异SOD酶活性,酶比活可达326.5 u/mg.
