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鱿鱼软骨II型胶原蛋白提取方法及结构分析
目的：从鱿鱼软骨中分离纯化非变性II型胶原蛋白，并对其进行结构表征。方法将鱿鱼软骨冻干后粉碎成200目软骨粉，用4%（w/w）NaOH溶液去除多糖、0.5 M EDTA溶液脱灰对软骨进行前处理，采用胃蛋白酶水解提取，NaCl盐析用纯水透析后冷冻干燥得到II型胶原蛋白样品。通过氨基酸组成分析、SDS-PAGE电泳、紫外吸收光谱、电镜扫描等对制备的样品鉴定。结果制备的II型胶原蛋白具有3条α1链，分子量112 kDa，在224.5 nm波长处有大紫外吸收，具有三螺旋结构特征。
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淫羊藿苷联合地塞米松对人髓核细胞增殖及分泌表达的影响
目的：探讨淫羊藿苷（ICA）与地塞米松（Dex）联合作用对人髓核细胞（hNPs）增殖及聚集蛋白聚糖（Aggrecan）、II型胶原蛋白（Col2a）、IL-6、IL-8和基质金属蛋白酶（MMP-13）表达的影响。方法取生长状态良好的hNPs按不同处理因素分为：control组（只含培养基）、ICA组（20μmol/L ICA）、Dex组（0.2μmol/L Dex）、ICA+Dex 组（20μmol/L ICA+0.2μmol/L Dex）、IL-1β组（10 ng/ml IL-1β）、ICA+IL-1β组（20μmol/L ICA+10 ng/ml IL-1β）、Dex+IL-1β组（0.2μmol/L Dex+10 ng/ml IL-1β）、ICA+Dex+IL-1β组（20μmol/L ICA+0.2μmol/L Dex+10 ng/ml IL-1β），各组作用48 h；CCK-8法检测细胞的增殖；Western blot、RT- PCR以及ELISA检测Aggrecan、Col2a、IL-6、IL-8和MMP-13表达。结果 CCK-8结果显示：与control组比较，低浓度的ICA（≤20μmol/L）和Dex（≤0.2μmol/L）单独作用均提高hNPs存活率但差异无统计学意义（>0.05）。然而，10μmol/L ICA和0.2μmol/L Dex联合用药对hNPs的存活率大于单独用药（<0.05）；Western blot、RT- PCR以及ELISA结果表明：与单独用药组相比，ICA和Dex联合作用促进Aggrecan、Col2a蛋白和mRNA表达（<0.05）；另外，ICA和Dex联合处理抑制IL-1β诱导的hNPs炎症介质IL-6、IL-8的分泌表达（<0.05），同时降低MMP-13蛋白、mRNA水平（<0.05）。结论 ICA与Dex联合作用对促进 hNPs增殖、Aggrecan和 Col2a表达有效果；同时抑制 IL-1β诱导的 hNPs炎症介质 IL-6、IL-8和MMP-13的表达，为椎间盘退行性病变的药物治疗提供理论依据。
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杜仲苷对炎性环境下软骨细胞的增殖和II型胶原蛋白分泌的影响
目的：观察杜仲苷对IL-1β刺激大鼠体外软骨细胞的增殖及II型胶原蛋白分泌的影响。方法：利用IL-1β刺激建立体外大鼠软骨细胞炎性模型，实验分为空白组、IL-1β组、10μM杜仲苷组、100μM杜仲苷组、500μM杜仲苷组、1000μM杜仲苷组；空白组加入10%FBS培养液，IL-1β组加入10ng/mL IL-1β+10%FBS培养液，4个不同浓度杜仲苷组分别加入10μM、100μM、500μM、1000μM杜仲苷+10ng/mL IL-1β+10%FBS培养液，分别培养48小时，采用CCK8检测软骨细胞增殖活力及II型胶原蛋白的分泌。结果：IL-1β组的OD值低于空白组（P<0.05）；4个不同浓度杜仲苷组的OD值均高于IL-1β组（P<0.05），且存在一定的量效关系；4个不同浓度杜仲苷组的II型胶原蛋白表达均高于IL-1β组（P<0.05），且存在有一定的量效关系。结论：杜仲苷可以提高体外大鼠软骨细胞炎性环境下的增殖活力，促进II型胶原蛋白的分泌，表明杜仲苷对体外大鼠软骨细胞有一定的抗炎保护作用。
