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依赖核酸序列扩增技术检测呼吸道合胞病毒方法的建立
目的：建立依赖核酸序列扩增技术（NASBA）检测呼吸道合胞病毒（RSV）的方法。方法依据美国国家生物技术信息中心（NCBI）基因数据库，利用 Primer 5软件进行 RSV 特异性引物设计。收集经免疫荧光法检测确认 RSV 阳性的咽拭子样本，以同批检测 RSV 阴性样本作为阴性对照。优化样本处理条件和扩增反应体系，建立 NASBA 检测 RSV 的方法，并与逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）进行比较。结果采用直接冻融法处理咽拭子样本，取上清检测；引物设计原则为引物加 T7启动子序列。NASBA 在 RSV RNA 标准品浓度为2.81×102拷贝/μL 时仍能检测出目的片段，而 RT-PCR 在2.81×104拷贝/μL 时目的条带隐约可见，提示 NASBA的灵敏度比 RT-PCR 高出至少100倍。NASBA 在7例 RSV 阳性咽拭子样本中特异性扩增出 RSV RNA，而在其他病毒阳性（包括流感病毒 A 阳性2例、副流感病毒3阳性2例、腺病毒阳性1例）及 RSV 阴性（3例）样本中未见目的条带，提示 NASBA 的特异性较高。结论建立的 NASBA 特异性强、灵敏度高、耗时相对较短，克服了目前实验室病毒检测方法的局限性，为 RSV 的检测提供了有效的实验室检测手段。
关键词： 呼吸道合胞病毒 依赖核酸序列扩增技术 方法学评价 -
狂犬病病毒核酸诊断技术研究进展
狂犬病是由狂犬病病毒引起的人兽共患烈性传染病，发病后死亡率几乎为100％。近年来，我国狂犬病的发病率呈上升趋势，急需一种快速、简便、经济、准确、易于推广的实验室诊断方法。文中从基于PCR方法的核酸诊断技术、依赖核酸序列扩增技术、环介等温扩增技术、基因芯片技术等方面对目前国内外狂犬病病毒核酸诊断技术作一综述，并分析各种方法的优点和缺点，为狂犬病的临床快速诊断提供参考依据，以更好地预防和控制狂犬病。
关键词： 狂犬病病毒 核酸诊断 依赖核酸序列扩增技术 环介等温扩增技术 基因芯片技术
