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FⅧ基因内含子1倒位及X染色体非随机灭活导致的女性血友病A1例
目的:对1例女性血友病A(HA)患者进行基因分析,探讨其分子发病机制,并对其表姐进行携带者诊断.方法:测定1例女性HA患者的活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、FⅧ活性(FⅧ: C)、FIX活性(FⅨ:C)及血管性血友病因子(vWF)等,并进行HA表型诊断;采用长距离PCR及序列特异PCR检测其FⅧ基因内含子22及内含子1倒位,并对FⅧ基因的所有外显子及其侧翼序列进行测序.对FⅧ基因内外的8个多态性位点进行遗传连锁分析.应用凝胶电泳法检测PCR产物分析DXS 52(ST14)位点多态性,采用多重荧光PCR法检测7个STR位点(F8Civs13、 CA22、 DXS15、 DXS9901、 G6PD、DXS1073及DXS1108)的多态性.应用甲基化敏感的HpaⅡ内切酶,对基因组DNA进行酶切;荧光PCR法对HpaⅡ酶切前后的基因组DNA进行人雄激素受体基因(HUMARA) CAG重复序列扩增;荧光扫描法对扩增产物进行检测,并根据酶切前后PCR产物的峰值变化,分析判断X染色体的随机灭活模式.结果:表型检测先证者APTT延长(128.5s),FⅧ:C活性明显下降(<1%),家系另2例患者FⅧ:C活性亦明显下降(<1%).该家系成员FⅧ内含子22倒位检测均为阴性;1倒位检测则显示该女性HA患者为阳性携带者,该家系另2例男性患者均显示为该倒位阳性;该女性HA患者FⅧ基因测序未发现突变.遗传连锁分析发现,该女性患者携带致病基因的染色体遗传自其母亲;其X染色体为非随机灭活,遗传自父亲的X染色体被大部分灭活,而遗传自母亲的X染色体保留3大部分活性.结论:该女性HA患者存在FⅧ基因内含子1倒位的X染色体来自其母亲,且在X染色体非随机灭活中保留了活性.FⅧ基因内含子1倒位及X染色体非随机灭活导致了女性HA的发生.
关键词： 血友病A 女性患者 X染色体随机灭活模式 基因诊断
