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3种猪带绦虫重组双歧杆菌候选疫苗在家猪体内的mRNA表达
目的 检测3种猪带绦虫重组双歧杆菌候选疫苗在家猪体内的表达情况. 方法 将40日龄健康家猪分别用1011克隆形成单位(colony forming units,CFU)的猪带绦虫Bb-TSO45W-4B、Bb-TSOL18和Bb-TSO45W-4B-TSOL18重组候选疫苗对家猪口服灌胃.首次免疫2周后加强免疫1次.于首免后56 d,剖杀家猪,无菌取肝、肺、脾,采用RT-PCR方法检测上述3种候选疫苗在家猪体内的mRNA表达情况. 结果 在家猪肝脏、肺脏和脾脏中均检测到猪带绦虫TSO45W-4B基因的mRNA,其中肝脏和肺脏的相对表达量为3.3,3.3,1肝脏和肺脏的相对表达量高于脾脏;猪带绦虫TSOL18基因在家猪肝脏和脾脏中均有表达,其中肝脏相对表达量为2.6,高于脾脏的1;猪带绦虫TSO45W-4B-TSOL18融合基因在肝脏、肺脏和脾脏中均有表达,相对表达量依次为0.2、2.4、2.1. 结论 3种猪带绦虫重组双歧杆菌候选疫苗可在家猪体内表达,有利于发挥疫苗的免疫效应.
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猪带绦虫重组双歧杆菌疫苗不同保存条件下的稳定性研究
目的 研究猪带绦虫TSO45W-4B基因、TSOL18基因和TSO45W-4B-TSOL18融合基因的重组双歧杆菌(Bb)疫苗在不同保存条件下的稳定性.方法 分别将猪带绦虫重组质粒pGEX-TSO45W-4B、pGEX-TSOL18和pGEX-TSO45W-4B-TSOL18电转入长双歧杆菌(B.longum),获得阳性菌株pGEX-TSO45W-4B/B.longum、pGEX-TSOL18/B.lon gum和pGEXTSO45W-4B-TSOL18/B.longum,分别置于不同条件下保存,取出菌液,抽提质粒,电泳检测,进行稳定性分析.结果 阳性菌株pGEX-TSO45W-4B/B.longum、pGEX-TSOL18/B.long um和pGEX-TSO45W-4B-TSOL18/B.longum分别在常温下、4℃、-20℃、-80℃、-196℃(液氮中)分别保存48 h、1周、1月、2月,抽提质粒,电泳发现阳性菌株pGEX-TSO45W-4B/B.longum、pGEX-TSOL18/B.longum和pGEX-TSO45 W-4B-TSOL18/B.longum在液氮中、-80℃、-20℃中比较稳定,而在普通的室温环境下,很快发生质粒丢失现象.结论 猪带绦虫TSO45W-4B基因、TSOL18基因和TSO45W-4B-TSOL18融合基因的重组Bb疫苗低温保存稳定,常温差,这为猪带绦虫重组Bb疫苗的进一步研究奠定了基础.
