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恶性疟原虫AMA-1多态性及其在疫苗研制中的意义
恶性疟原虫裂殖子顶端膜抗原1(AMA-1)是一种主要的无性血液期疟疾疫苗候选抗原.本文简述了AMA-1的生物学特性、结构及其在裂殖子入侵过程中的作用,对AMA-1的多态性特点和分布规律以及近期在疟疾复合多价疫苗研制中的应用情况进行了综合分析.
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恶性疟原虫AMA-1(Ⅲ)基因在毕赤酵母系统中的高效表达
目的利用毕赤酵母高效表达系统表达用于下游实验的恶性疟原虫AMA-1(Ⅲ)重组蛋白.方法将测序正确的AMA-1(Ⅲ)基因插入毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9k中,用高压电穿孔转化法将目的基因转化入酵母感受态细胞GS115,筛选高拷贝转化子,利用甲醇进行诱导表达.表达产物用SDS-PAGE和免疫印迹进行检测.结果 AMA-1(Ⅲ)蛋白表达于培养上清,蛋白的相对分子质量分别为16.3ku,免疫印迹结果表明AMA-1(Ⅲ)基因表达蛋白能被抗AMA-1(Ⅲ)的单抗所识别,出现特异条带,推算AMA-1(Ⅲ)蛋白的表达量为0.8g/L.结论酵母细胞表达系统可高效表达在构象方面接近天然蛋白的AMA-1(Ⅲ)重组蛋白.
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恶性疟原虫海南株AMA-1、Pfs230基因的序列分析
目的测定恶性疟原虫海南(FCC1/HN)株裂殖子顶端膜抗原1(AMA-1)基因和Pfs230基因序列,并分别进行序列分析.方法根据AMA-1基因已知序列合成一对引物,用PCR技术从恶性疟原虫FCC1/HN株基因组DNA中扩增AMA-1基因,构建真核表达重组质粒pcDNA3-AMA-1.根据Pfs230基因已知序列合成七对引物,分7段从FCC1/HN株基因组DNA中扩增Pfs230基因,并分别将扩增片段插入pMD-18T测序载体.用双脱氧链末端终止法测定克隆的AMA-1、Pfs230基因序列,应用DNAstar软件辅助进行序列分析和同源性比较.结果 PCR扩增得到恶性疟原虫FCC1/HN株AMA-1和Pfs230基因片段.恶性疟原虫FCC1/HN株AMA-1基因全长1 869bp,无内含子,编码622个氨基酸残基,不存在氨基酸重复序列,相对分子量约 72.045kDa;Pfs230基因全长9435bp,无内含子,编码3 144个氨基酸残基,分子量为364.36kDa.恶性疟原虫FCC1/HN株与FC27、7G8、CAMP、FCR3、Thai-Tn、3D7、FVO、KF1916、CMP1、HB3、K1和V1株AMA-1的同源性在94.9%以上,各株间有53个位置相同的氨基酸残基替代位点,并且发生替代的氨基酸残基具二态性.FCC1/HN株分别比3D7、7G8株Pfs230抗原多9、10个氨基酸残基,三个分离株有28个氨基酸替换位点.结论序列测定及同源性分析表明,恶性疟原虫FCC1/HN株与其它分离株的AMA-1、Pfs230具有很高的同源性.
