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反义Smad3阻断TGF-β1信号转导对大鼠BMSC分化成平滑肌样细胞的影响
目的 研究信号蛋白Smad3在TGF-β1促大鼠骨髓间充质干细胞分化成平滑肌样细胞中的作用.方法 运用免疫细胞化学、RT-PCR证实BMSC中存在TGF-β1/smad3信号传导通路的基础上,运用反义Smad3进行干预.实验分三组:反义Smad3组(反义Smad3腺病毒转染大鼠BMSC),空载对照组(空载腺病毒转染大鼠BMSC)及未转染组;三组均予10 ng/mL浓度的TGF-β1诱导1 W.通过免疫细胞化学和实时定量PCR比较反义Smad3干预后各组SMa-actin的表达变化.结果 经免疫细胞化学法、RT-PCR检测证明BMSC中存在TGF-β1/smad3表达.运用针对靶基因Smad3的反义技术干预后.经10 ng/mLTGF-β1诱导,相比未转染组及空载组,反义smad3腺病毒转染组SMa-actm阳性细胞表达数明显减少,实时定量PCR也显示反义smad3组SM a-actm mRNA的相对含世明显低己于未转染组(0.460±0.259 vs 2.932+0.375,P＜0.01),而空载组与未转染组相比无明显统计学差异.结论 TGF-β1促BMSC成平滑肌样细胞分化的过程中受Smad3选择性调节,Smad3可能是TGF-β1促BMSC分化成平滑肌样细胞的细胞内信号途径.
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反义Smad3阻断TGF-β1信号转导对血管平滑肌细胞增殖能力的影响
殖能力明显降低(P<0.05),转染后第7天各组细胞增殖能力差异无统计学意义(P>0.05).结论 反义Smad3腺病毒载体转染对增生型VSMC具有增殖抑制作用,为通过基因修饰阻断TGF-β1信号转导从而预防增生性血管病变奠定了基础.
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反义Smad3转染阻断TGF-β1信号转导对球囊损伤后大鼠血管内膜增生的影响
目的 通过建立大鼠颈动脉球囊损伤模型并体内转染反义Smad3腺病毒载体,研究阻断TGF-β1/Smad3信号途径对损伤后大鼠颈动脉内膜增生的影响.方法 90只SD大鼠随机分为单纯损伤组(单纯球囊损伤大鼠颈动脉内膜)、干预组(损伤后局部保留灌注反义Smad3腺病毒液)、空白对照组(损伤后局部灌注空载腺病毒液);另取6只同周龄大鼠作为正常对照组(不进行任何处理).各组分别在损伤后第1天、3天、1周、2周、1月、3月时处死大鼠并取材.ELISA法检测单纯损伤组和正常对照组不同时间点血清中TGF-β1的质量浓度;Real-time PCR和HE染色法分别检测三个损伤组在不同时间点Smad3 mRNA表达和血管壁内膜、中膜厚度.结果 单纯损伤组各时间点TGF-β1的质量浓度较正常对照组显著升高(P<0.05).干预组第1天、3天、1周、2周、1月时的Smad3 mRNA表达和第1天、2周、3月时的内膜/中膜比值均较单纯损伤组明显下降(P<0.05);单纯损伤组与空白对照组各指标比较差异均无统计学意义(P>0.05).结论 体内转染反义Smad3可以阻断TGF-β1/Smad3信号转导,从而抑制内膜增生.
关键词： 球囊损伤 内膜增生 TGF-β1/Smad3信号通路 反义Smad3 腺病毒
