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ZNF278 siRNA抑制胃癌细胞株AGS增殖的实验研究
背景:ZNF278属C2H2型锌指蛋白,为参与生长发育的重要转录因子,其异常表达可能参与肿瘤发生.目的:研究ZNF278 siRNA对胃癌细胞株AGS增殖和周期的影响.方法:以蛋白质印迹法检测正常胃上皮细胞株GES-1和胃癌细胞株AGS中ZNF278表达.构建ZNF278 siRNA片段,并转染胃癌AGS细胞,转染阴性对照siRNA和RPMI1640分别作为阴性对照组和空白对照组.以定量RT-PCR和蛋白质印迹法分别检测ZNF278 mRNA和蛋白表达,利用MTT和细胞计数法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞周期变化.结果:胃癌AGS细胞中ZNF278表达明显高于正常胃上皮细胞GES-1.ZNF278 siRNA转染胃癌AGS细胞后,ZNF278 mRNA和蛋白表达均明显下调,而阴性对照组与空白对照组无明显差异.MTT法示ZNF278 siRNA组AGS细胞增殖率显著低于阴性对照组(0.64±0.03对0.81±0.03,P＜0.01),细胞计数法示细胞数量亦显著降低[(4.11 ±0.35)×105对(5.78±0.50)×105,P＜0.01],流式细胞术显示ZNF278 siRNA组G0/G1期细胞明显增加而S期细胞明显减少(P＜0.05).结论:转染ZNF278 siRNA可抑制胃癌AGS细胞增殖,细胞周期阻滞于G0/G1期.
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重组人ZNF278促进胃癌细胞系SGC7901增殖的研究
目的:构建pcDNA3.1-ZNF278重组人真核表达质粒,研究ZNF278对胃癌细胞增殖和周期的影响.方法:PCR扩增正常人胃黏膜组织中的ZNF278基因,并用EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切,与酶切后的pcDNA3.1-myc-his载体连接,转化DH5α大肠杆菌,克隆筛选,提取重组质粒,酶切鉴定并测序.重组人ZNF278真核表达质粒转染胃癌细胞系SGC7901,定量PCR和Western blot技术检测ZNF278表达状况,利用MTT和细胞记数法检测细胞增殖,同时分析细胞周期变化.结果:测序证实pcDNA3.1-ZNF278真核表达质粒构建成功,并成功转染SGC7901细胞,检测确认ZNF278表达上调,转染重组pcDNA3.1-ZNF278质粒的SGC7901细胞较对照组生长加快,促进细胞周期进入S期.结论:pcDNA3.1-ZNF278重组质粒构建成功,并可促进胃癌细胞系SGC7901细胞增殖和细胞进入分裂期.
