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粉尘螨Ⅲ类重组变应原对哮喘小鼠免疫治疗的效果
目的 探讨粉尘螨Ⅲ类重组变应原(rDer f3)对过敏性哮喘小鼠的免疫治疗效果. 方法 随机将40只BALB/c小鼠均分为4组,哮喘组、免疫治疗组、卵清蛋白(OVA)组和PBS组,分别在第0、第7和第14天哮喘组和免疫治疗组每鼠经腹腔注射100 μl致敏液(含rDerf 3 10 μg);卵清蛋白组每鼠经腹腔注射100 μl致敏液(含OVA 10 μg);PBS组则以PBS代替致敏液.第21天起,哮喘组和免疫治疗组小鼠用rDerf3进行滴鼻激发试验,连续7d,免疫治疗组小鼠在第25 ～27天滴鼻激发前30 min,用100 μg rDerf3纯化蛋白皮下注射进行特异性免疫治疗.PBS组和卵清蛋白组则分别用PBS和OVA进行滴鼻激发和腹腔注射,后1次滴鼻激发24 h后脱臼处死小鼠.收集各组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)进行白细胞和嗜酸粒细胞计数;对肺组织病理切片进行HE染色,镜下观察肺组织炎症细胞浸润情况.ELISA检测BALF和脾细胞培养上清(SSCS)中白细胞介素-5(IL-5)和y干扰素(IFN-y)及血清中变应原特异性IgE、IgG2a抗体水平. 结果 肺组织病理切片结果显示,免疫治疗组小鼠炎症反应明显减轻.小鼠BALF中白细胞总数在免疫治疗组、卵清蛋白组和哮喘组分别为(7.03±1.38)×108/ml、(22.11±3.70)×108/ml和(22.75±3.24)×108/ml,免疫治疗组低于卵清蛋白组和哮喘组(P＜0.01),嗜酸粒细胞的变化趋势与白细胞类似.免疫治疗组、卵清蛋白组和哮喘组BALF中IL-5的水平分别为(108.20±11.02) pg/ml、(182.04±13.94) pg/ml和(19533±1533) pg/1ml,SSCS中IL-5的水平分别为(98.34±13.06) pg/ml、(208.26±10.63) pg/ml和(179.54±13.65) pg/ml,免疫治疗组均明显低于卵清蛋白组和哮喘组(P＜0.01).而IFN-y含量则高于卵清蛋白组和哮喘组(P＜0.01).IgE水平免疫治疗组、卵清蛋白组和哮喘组分别为(9.12±3.78) IU/ml、(26.87±4.30) IU/ml和(35.25±8.84) IU/ml,与卵清蛋白组和哮喘组相比,免疫治疗组明显降低(P＜0.01),而IgG2a水平(38.52±6.33) μml则显著升高(P＜0.01). 结论 粉尘螨Ⅲ类变应原可逆转哮喘小鼠的变态反应性气道及肺部炎症.
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粉尘螨主要变应原基因Der f2和Der f3基因改组的优化
目的：优化粉尘螨变应原Der f2和Der f3基因改组条件，以期获得粉尘螨变应原融合突变基因。方法 RT- PCR方法扩增粉尘螨变应原Der f2和Der f3基因，用DnaseⅠ分别酶解Der f2和Der f3基因10、15、20、25、30min；酶解相同时间的Der f2和Der f3基因两两混合，采用DNA shuffling技术对粉尘螨变应原Der f2和Der f3基因进行重组，电泳检测重组子。结果以Der f1 F和Der f1 R、Der f2 F和Der f2 R为引物分别在酶切10min、15min、20min、25min均可扩增出清晰条带；以Der f2 F和Der f3 R为引物在酶切10min、15min和30min的模板中亦出现PCR片段。结论通过多种条件的组合，可获得多个粉尘螨变应原Der f2和Der f3基因间的融合基因，为大规模制备高效，低价的哮喘疫苗奠定基础。
