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日本血吸虫虫卵SjE16、SjPPIase和SjRobl基因的真核表达及其在诊断中的应用
目的 真核表达日本血吸虫虫卵蛋白,并评价其在血吸虫病免疫学诊断中的作用. 方法 提取日本血吸虫虫卵RNA,逆转录后获得cDNA.PCR扩增日本血吸虫虫卵特异性或高表达基因SJCHGC01695(SjE16)、SJCHGC00856 (SjIMA8)、SJCHGC06249(SjTOR)、SJCHGC06324 (SjP40)、SJEFTD02(SjSLP)、SJCHGC06679(SjPPIase)和SJCHGC06529 (SjRobl),亚克隆至真核表达载体pPIC9K.重组质粒电转至毕赤酵母GS115菌株后,甲醇诱导目的蛋白表达.镍-次氮基三乙酸(Ni-NTA)亲和层析纯化获取重组蛋白后,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)对其进行分析鉴定.以血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)、重组蛋白SjE16、SjPPIase和SjRobl单用,3个重组蛋白两两伍用,及全部伍用作为包被抗原,ELISA法检测血吸虫感染小鼠血清、急性血吸虫病和慢性血吸虫病患者血清中相应抗体的反应性. 结果 PCR扩增获得7个日本血吸虫虫卵高表达基因,经酵母重组表达和Ni-NTA亲和层析纯化后成功获得3个重组蛋白SjE16、SjPPIase和SjRobl.SDS-PAGE和Western blotting鉴定结果显示,所获得的重组蛋白为目的蛋白.ELISA检测结果显示,血吸虫感染小鼠血清和血吸虫病患者血清中均可检测出被SjE16、SjPPIase和SjRobl识别的特异性IgM和IgG抗体.在急性血吸虫病患者中上述3种抗原IgM的检出率分别为80％、60％和80％,IgG检出率分别为40％、80％和70％.伍用组中,SjE16和SjRobl伍用抗原,检测急性血吸虫病患者血清中IgM抗体的敏感性为100％,高于其单独为抗原的敏感性. 结论 获得的3个日本血吸虫虫卵蛋白(SjE16、SjPPIase和SjRobl)均具有血吸虫病诊断的潜能,其中SjE16和SjRobl伍用抗原可提高急性血吸虫病诊断敏感性.
