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  • 酵母双杂交筛选与弓形虫毒力因子ROP18相互作用的宿主蛋白

    作者:都建;安然;程里;陈滢;沈继龙

    目的 利用酵母双杂交方法,筛选与弓形虫毒力因子ROP18相互作用的宿主蛋白. 方法 RT-PCR扩增弓形虫RH株速殖子ROP18基因片段,扩增产物经双酶切后插入酵母双杂交诱饵载体pGBKT7中,将重组质粒导入酵母AH109菌株中,检测诱饵载体有无毒性和自激活作用,利用酵母双杂交系统从人胚胎脑cDNA文库中筛选与ROP18相互作用的宿主蛋白. 结果 构建了诱饵载体pGBKT7-ROP18,ROP18具有自激活功能.用ROP1825-251aa为诱饵,筛选获得一系列与ROP18相互作用的宿主蛋白:DNA损伤特异性结合蛋白1(DDB1)、torsin A相互作用蛋白1(TOR1AIP1)、整联蛋白β31 (integrinβ1)、溶质运载蛋白3(SLC3A2)、酪氨酸硫化转移酶2(TPST2)、Derl样域家族成员2 (DERL2)和OCIA结构域蛋白1(OCIAD1). 结论 通过酵母双杂交技术筛选出与弓形虫毒力因子ROP18相互作用的多种宿主蛋白.

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