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棘阿米巴土壤分离株CB/S1内共生细菌的16SrDNA序列分析
用地衣红-卡红染色进行共生菌的形态观察,鉴定棘阿米巴CB/S1内共生细菌.克隆内共生细菌的16S rDNA基因,进行基因序列分析.结果 表明,经地衣红-卡红染色棘阿米巴CB/S1内共生细菌呈黑色和棒状,在胞质内不规则分布.棘阿米巴CB/S1内共生细菌的16S rDNA基因长1 534 bp,与类亚洲嗜阿米巴杆菌(Candidatus Amoebophilus asiaticus 5a2)和韩国棘阿米巴分离株 KA/E21内共生细菌的16S rDNA基因的同源性均为98%.进化树分析表明,棘阿米巴CB/S1内共生细菌与韩国棘阿米巴KA/E21内共生细菌、类亚洲嗜阿米巴杆菌、黑脚硬蜱内共生细菌和伯恩蚜小蜂内共生细菌等细菌构成单系.
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棘阿米巴土壤分离株CB/S1的线粒体DNA限制性片段长度多态性
[目的]观察棘阿米巴土壤分离株CB/S1的线粒体DNA限制性片段长度多态性(RFLP).[方法]从棘阿米巴CB/S1提取线粒体DNA用Eco RI酶切,与土壤分离株CJY/S4比较观察限制性片段长度多态性.用地衣红-卡红染色观察棘阿米巴内共生细菌.[结果]棘阿米巴土壤分离株CB/S1线粒体DNA RFLP与CJY/S4相比除了额外的片段(extra bands),两个分离株具有相同的片段模式.经地衣红染色观察CB/S1内共生细菌呈黑色、棒状、不规则的分布在胞质内.[结论]额外的片段表明棘阿米巴CB/S1内含有内共生细菌的环状DNA,并且除了内共生细菌的存在棘阿米巴CB/S1与土壤分离株CJY/S4具有密切的亲缘关系.线粒体DNA限制性片段长度多态性是棘阿米巴分类及发现内共生细菌的简便而有效的方法.
关键词: 棘阿米巴 内共生细菌 限制性片段长度多态性