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日本血吸虫SjPP基因重组杆状病毒的构建和在昆虫细胞中的表达
目的 在昆虫细胞中表达获得可溶性的日本血吸虫SjPP重组蛋白.方法 提取日本血吸虫成虫总RNA,通过RT-PCR扩增出SjPP基因的编码区序列,将其定向克隆到供体质粒pFastBac HT-B中,构建重组杆状病毒供体质粒pFastBac-SjPP,转化人大肠埃希菌DH10Bac进行转座,提取重组杆粒Bacmid-SjPP,用阳离子脂质体法转染粉纹夜蛾(TN5B1-4)细胞.利用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)分析重组蛋白表达情况.结果 构建了含日本血吸虫SjPP基因的重组杆粒Bacmid-SjPP,转染TN5B1-4细胞后,获得有感染力的重组杆状病毒,并在TN581-4细胞中成功表达SjPP蛋白.该重组蛋白可被抗SjPP蛋白的兔血清识别.结论 成功构建SjPP基因重组杆状病毒,并在TN581-4细胞中表达,该蛋白具有良好的抗原性.
关键词： 日本血吸虫 SjPP Bac-to-Bac杆状病毒表达系统
