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胰岛素样生长因子Ⅱ及雷帕霉素的联合干预在胰腺干细胞分化中的保护机制研究
目的 研究免疫抑制剂雷帕霉素抑制新生猪胰腺成体干细胞(porcine neonatal pancreas cell clusters,NPCCs)分化和增殖的机制,探索能有效降低雷帕霉素不良反应的治疗方法.方法 雷帕霉素/胰岛素样生长因子Ⅱ(insulin-like growth factor-Ⅱ,IGF-Ⅱ)处理NPCCs,检测caspase-3试验和[3 H]-胸腺嘧啶摄取试验分析细胞凋亡和增生,RT-PCR及Western blot分析胰岛细胞特定基因胰岛素、PDX-1、NeuroD/Beta2以及IGF-Ⅱ下游转录因子Foxo1的表达,评估胰腺成体干细胞的分化能力.结果 NPCCs用雷帕霉素处理后,抑制β细胞的增殖、增加细胞凋亡,降低胰岛素分泌能力,抑制胰岛细胞特定基因PDX-1和NeuroD/Beta2的表达,明显降低IGF-Ⅱ的表达,增加Foxol的表达并诱导Foxol从胞质到细胞核的异位.雷帕霉素与IGF-Ⅱ的联合处理降低雷帕霉素的不良反应,抑制β细胞数量及胰岛素含量的减少,修复胰岛素、PDX-1、NeuroD/Beta2的表达,抑制Foxo1的表达及细胞内异位.结论 IGF-Ⅱ及Foxol基因的异常表达是雷帕霉素抑制NPCCs的增殖和分化的重诱因,且IGF-Ⅱ干预能有效降低雷帕霉素对NPCCs分化的不良反应.
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MiR-217对小鼠胰腺成体干细胞增殖的调控作用
为了进一步研究miR-217在小鼠胰腺成体干细胞生长过程中的调控作用,在培养的胰腺成体干细胞中过表达miR-217,用Western blot和免疫荧光的方法检测miR-217对细胞增殖的影响.结果显示,miR-217能够明显抑制胰腺成体干细胞增殖相关蛋白Cyclin D1和Ki-67的表达.使用生物信息学软件预测miR-217的靶基因,并通过双荧光素酶报告基因的方法验证了miR-217对靶点的靶向性,实验结果表明,miR-217能够抑制PMIR-REPORT-Sirt 1-3'UTR荧光素酶活性.进一步在二维培养的胰腺成体干细胞中,过表达miR-217检测Sirt1的表达变化,qPCR和Western blot表明在胰腺成体干细胞中miR-217能够抑制Sirt1的蛋白水平的表达,但对mRNA水平没有影响.在胰腺成体干细胞中分别加入Sirt1的抑制剂尼克酰胺和激动剂白藜芦醇,尼克酰胺能够抑制胰腺成体干细胞的增殖,而白藜芦醇促进了胰腺成体干细胞的增殖.以上结果说明,miR-217通过Sirt1调控胰腺成体干细胞的生长,低表达的miR-217有助于维持胰腺成体干细胞的增殖.
