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瘦素对培养肝细胞的糖原合成及糖原合成酶mRNA表达的影响
瘦素是近年发现的肥胖基因(ob基因)的表达产物,由脂肪细胞分泌,具有促进产热及抑制食欲的功能,是机体维持正常体重不可缺少的激素.肥胖者表现高瘦素血症,且易发生糖代谢异常,是糖尿病发病的独立危险因素.本研究观察不同剂量的瘦素对肝细胞基础状态和胰岛素刺激下对糖原合成和糖原合成酶(GS)的影响.一、材料和方法1.材料与试剂:正常大鼠肝细胞株BRL(上海细胞生物研究所),RPMI1640培养基和MEM培养基(GibcoBRL),瘦素(R&D),小牛血清和Whatman滤纸(天象人),D-[U-14C]葡萄糖(中国科学院核医学技术中心),闪烁液PPO、POPOP(Sigma),TRIzol Reagent(GibcoBRL),TitanTM One Tube RT-PCR Kit(BM),焦碳酸二乙酯(DEPC)(天象人),DNA markers(QIEQA),PCR引物(上海生物工程公司).
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RNA分析中的核糖核酸酶控制
随着分子生物学的理论和方法的不断改进,以及前基因组计划的初步完成,人类对疾病的认识从原有的器官、细胞水平深入到分子水平.越来越多的预防医学研究者开始着手于分析DNA、RNA和蛋白质分子,来探索各种疾病,尤其是慢性病的发病原因.现已肯定大多数慢性病的发病与环境和基因交互作用有关,基因表达水平的质和量是影响疾病发生和发展的主要因素,因此对患者的RNA水平作定量分析必不可少.