首页 > 文献资料
-
甲状腺激素反应蛋白1基因-一个新的鼠脑甲状腺激素反应基因的克隆、表达分布及其功能预测
目的克隆新的大鼠脑甲状腺激素反应基因,研究其表达特征并初步预测其功能.方法建立先天性甲状腺功能减退(甲减)新生大鼠模型,用荧光标记的差异显示PCR(DD-PCR)技术、亚克隆、测序及相似性检索获得未知的大鼠脑甲状腺激素反应基因的cDNA片段.采用电子克隆、RT-PCR、测序并克隆其cDNA全长.经Northern印迹法证实其表达受到甲状腺激素的调节,并用半定量RT-PCR方法和生物信息学技术观察其分布转录水平和预测其功能.结果克隆了甲状腺激素反应蛋白1(thyroid hormone-response protein-1,TRP-1)基因全长cDNA,共973 bp(基因登录号为AF348365),在甲减新生大鼠的脑中,该基因的转录增强.该基因表达广泛,以脑组织中的表达水平高;其在大鼠不同脑区的表达含量亦不同,以嗅脑高.该基因的编码产物具有一些重要的结构域和功能基序.结论 TRP-1基因是新发现的甲状腺激素反应基因,它在正常的脑发育中可能具有重要的作用,其异常表达可能是甲减性脑发育障碍发生的分子机制之一.
关键词： 甲状腺激素类 差异显示聚合酶链反应 印迹法 RNA 电子克隆 甲状腺激素反应蛋白1基因 -
用差异显示PCR法筛选与血管外膜细胞表型转化相关的基因
为筛选血管外膜成纤维细胞(adventitial fibroblast, AF)与肌成纤维细胞(myofibroblast, MF)间表型转化有关的基因, 实验建立了大鼠胸主动脉AF和MF两种细胞模型, 用差异显示聚合酶链反应(DD-PCR)技术获得表达差异片段, 对差异片段进行克隆和测序分析, 并用定量PCR和Northern blot对差别显示结果进行验证.用反义核酸转染技术观察骨桥蛋白(osteopontin, OPN)对AF迁移的影响. 结果表明, 两种表型细胞存在明显的基因表达差异, 其中一个在MF下调的差异片段与GenBank 中NADH脱氢酶亚单位5 (NADH dehydrogenase subunit 5, Nd5)基因高度同源.另一个在MF上调的差异片段与OPN基因同源.上述差异表达结果被定量PCR及Northern blot证实.此外还有4个表达序列标志(expressed sequence-tag, EST)在GenBank中未查到同源序列.反义OPN寡脱氧核苷酸可抑制AF的迁移活动. 结果提示, AF转化为MF可能与ND5基因下调、 OPN上调及其它未知基因的表达改变有关.应用反义技术适度抑制OPN表达在防治血管重塑中具有重要作用.
关键词： 血管外膜 成纤维细胞 肌成纤维细胞 差异显示聚合酶链反应 反义技术
