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皮质酮诱导的大鼠Leydig细胞凋亡中核因子κB活化及其作用的研究
目的:评价在皮质酮诱导的大鼠Leydig细胞凋亡中是否有核因子κB的活化及其作用.方法:将90天龄雄性Sprague-Dawley大鼠睾丸Leydig细胞分离后,体外培养,再经皮质酮处理6、12、24小时.用Western blot检测细胞核内核因子κB的P65亚单位及细胞质内IκB表达水平的变化.以抗Fas抗体处理Leydig细胞3小时,再经Western blot检测细胞核内与细胞质内P65亚单位表达水平的变化.过量表达P65或以100 μmol/L二硫代氨基甲酸吡咯烷抑制核因子κB的活化,以流式细胞术评价两者对皮质酮诱导Leydig细胞凋亡的影响.结果:皮质酮处理使细胞核内P65亚单位增多,细胞质内IκB减少.抗Fas抗体处理使P65亚单位在细胞核内增多,而在细胞质内减少.过量表达P65亚单位可抑制皮质酮诱导的Leydig细胞凋亡;抑制核因子κB的活化则促进凋亡.结论:皮质酮诱导的大鼠Leydig细胞凋亡过程中存在核因子κB的活化,且此活化过程可能是由Fas/FasL介导的.核因子κB对皮质酮诱导Leydig细胞凋亡具有抑制作用.
关键词： 大鼠Leydig细胞 核因子κB 皮质酮 凋亡 -
胰岛素样生长因子-I和人绒毛膜促性腺激素对成年大鼠Leydig细胞葡萄糖转运蛋白基因表达调控
目的:研究胰岛素样生长因子-I(IGF-I)和人绒毛膜促性腺激素(hCG)对成年大鼠睾丸Leydig细胞中葡萄糖转运蛋白(GLUT)基因表达的影响,为进一步探讨Leydig细胞中睾酮的合成、分泌与葡萄糖代谢的关系提供依据.方法:采用改良的Klinefelter方法从成年大鼠睾丸中分离获得Leydig细胞;用反转录-聚合酶链技术检测IGF-I和hCG对原代培养的Leydig细胞中GLUT基因表达的调控作用.结果:分离得到纯度为98%的大鼠Leydig细胞,并与对照组比较,hCG可显著增加Leydig细胞中GLUT8基因mRNA的表达水平(P<0.001),且此作用具有剂量依赖性与时效性.当在试验组细胞中单独加入IGF-I或IGF-I和hCG作用于细胞后,发现IGF-I(100 ng/mL)可显著增加Leydig细胞中GLUT8基因mRNA的表达(P<0.01),也可与hCG协同作用显著提高GLUT8基因的mRNA表达,该结果与IGF-I(100 ng/mL)和hCG(10 ng/mL)能协同作用极显著增加睾酮合成水平(P<0.001)的结果是相吻合的.在大鼠Leydig细胞中,无论10 ng/mL或100 ng/mL还是两者同时作用于细胞,都不能影响GLUT1和GLUT3基因的mRNA水平.结论:在成年大鼠Leydig细胞中,IGF-I和hCG对细胞中的GLUT8基因表达的调节作用具有特异性,其协同作用能显著提高细胞中GLUT8基因mRNA水平,增强细胞摄取葡萄糖的能力,给细胞提供更多的代谢能源,终增加Leydig细胞睾酮的合成与分泌.
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IGF-Ⅰ和hCG对大鼠Leydig细胞葡萄糖转运蛋白基因表达调控研究
背景与目的:研究胰岛素样生长因子-I(Ⅰnsulin-like growth factor-Ⅰ,IGF-Ⅰ)和人绒毛膜促性腺激素(human Chorionic Gonadotropin,hCG)对成年大鼠Leydig细胞中葡萄糖转运蛋白(Glucose transporters,GLUTs)基因表达的影响,为进一步探讨Leydig细胞中睾酮的合成与葡萄糖代谢关系提供依据.材料与方法:采用改良的Klinefelter方法从成年大鼠睾丸中分离获得Leydig细胞,并用反转录-聚合酶链技术检测IGF-Ⅰ和hCG对Leydig细胞中GLUTs基因表达的调控作用.结果:分离得到纯度为98%的Leydig细胞,与空白对照组相比,hCG可显著增加Leydig细胞中GLUT8基因mRNA的表达,并且此作用具有剂量依赖性与时效性.100 ng/mlIGF-Ⅰ可显著增加Leydig细胞中GLUT8基因mRNA表达,并且IGF-Ⅰ可和hCG协同作用,显著提高GLUT8基因mRNA表达,该结果与100 ng/ml IGF-Ⅰ和10 ng/ml hCG协同作用显著增加睾酮合成的结果相吻合.然而,在大鼠Leydig细胞中,无论是10 ng/ml hCG或100 ng/ml IGF-Ⅰ单独作用或同时作用于细胞,都不影响GLUT1和GLUT3基因mRNA水平.结论:在成年大鼠Leydig细胞中,IGF-I和hCG对细胞中GLUT8基因表达的调节作用具有特异性,IGF-Ⅰ和hCG能协同作用显著提高细胞GLUT8基因mRNA水平,从而增强细胞摄取葡萄糖的能力,可为细胞提供更多的代谢能源,终增加了Leydig细胞睾酮合成与分泌.
