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软骨细胞膜片复合3D打印内支撑构建管状软骨的初步研究
目的:利用猪耳廓软骨细胞制备软骨细胞膜片,与3D打印聚酰胺带孔管状支架结合,构建管状软骨组织,用于气管软骨的缺损重建。方法用酶消化法分离获得原代猪耳廓软骨细胞,以5×105 cells/mL的密度将第2代软骨细胞接种于6 cm细胞培养皿上,在软骨细胞膜片培养环境中培养约14 d,获得完整软骨细胞膜片;4层软骨细胞膜片依次卷叠于3D打印的聚酰胺(PA12)带孔管状内支架上,以构建管状软骨组织复合物;体外静态培养12周或裸鼠皮下培养8周,对形成的管状软骨组织行大体观察及石蜡切片组织学染色鉴定。结果体外静态培养12周后,半透明管状软骨组织形成,组织学染色可见少量分泌的软骨细胞外基质,质软,弹性差;体内培养8周后,白色管状软骨组织形成,其组织学染色可见大量软骨细胞外基质分泌,质较硬,有一定弹性。结论利用软骨细胞膜片复合3D打印聚酰胺支架,可构建组织工程管状软骨,有望将其用于气管软骨缺损的修复。
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利用静电纺纳米膜复合3D打印支架构建“C”形环状软骨的初步研究
目的·利用兔耳廓软骨细胞,复合明胶(GT)/聚己内酯(PCL)静电纺纳米纤维膜,并结合3D打印聚乳酸己内酯(PLCL)支架,构建具有“C”形环状结构的组织工程软骨,用于气管软骨的移植修复.方法·用酶消化法分离获得原代兔耳廓软骨细胞.通过静电纺丝技术将GT和PCL纺制成纳米纤维膜,并剪裁成12 cm×2.5 cm的长方形膜片.以1×108个/mL的密度将第2代软骨细胞接种于电纺膜上,并将电纺膜均匀卷叠于3D打印的PLCL的“C”形环状支架上,约卷5层,以构建软骨组织复合物.埋于裸鼠皮下培养8周,对形成的软骨组织进行大体观察和石蜡切片组织学染色鉴定.结果·体内培养8周后,白色软骨组织形成,质软,有一定弹性.外观呈环状,有一定弧度,内表面明显可见凹凸不平、间隔排列的“C”形环状软骨结构,接近正常气管软骨的结构和形状.组织学染色可见大量典型的软骨陷窝形成以及大量软骨细胞外基质分泌.结论·利用兔耳廓软骨细胞,复合GT/PCL静电纺纳米纤维膜,并结合3D打印PLCL支架,可以构建出具有“C”形环状结构的组织工程软骨,有望应用于气管软骨的移植修复.