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以ITS为主要成分的无血清培养基对软骨细胞增殖和表型的影响
目的 观察以ITS为主要成分的无血清培养基对软骨细胞增殖和表型的影响.方法 培养猪耳软骨细胞,分为无血清组和含血清组,无血清组应用包含胰岛素铁硒传递蛋白(ITS)、地塞米松及维生素C为主要成分的无血清培养基;含血清组应用包含10％血清的常规培养基.观察平面和三维培养状态下无血清培养基对软骨细胞增殖、基质分泌和软骨表型维持的作用.结果 平面培养条件下,无血清组的细胞增殖率出现下调,细胞表型不能维持.在三维培养情况下无血清组可以保持软骨细胞存活和软骨细胞的表型,Ⅱ型胶原和蛋白多糖组织学染色结果与含血清组无明显差异,软骨特异幕困ColⅡ、Aggrecan的表达与含血清组无明显差异,并能够形成较好的软骨样组织.结论 以ITS、地塞米松及维生素C为主要成分的无血清培养基,在三维培养条件下能基本保持软骨细胞的存活和表型,可用于软骨细胞的体外三维培养.
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胰岛素铁硒传递蛋白促进组织工程软骨形成的作用
目的 研究胰岛素铁硒传递蛋白(ITS)对组织工程软骨形成的影响.方法 第2代猪关节软骨细胞单层培养或离心形成细胞聚集体,根据培养液不同分为2组:常规培养组(达尔伯克改良伊格尔培养基+体积分数10％胎牛血清)和ITS组(达尔伯克改良伊格尔培养基+体积分数10％胎牛血清+体积分数1％ITS),噻唑蓝(MTI)法评估2组软骨细胞增殖；细胞聚集体培养1、2、3、4周后取材,比较2组细胞聚集体大体形态、湿质量、组织学、Ⅱ型胶原( ColⅡ)免疫组织化学染色和软骨特异基因表达.结果 MTT检测显示第5、6、7天ITS组光密度值显著高于常规培养组(P＜0.01)；ITS组软骨细胞聚集体体积在培养3周和4周时明显大于常规培养组；ITS组湿质量培养4周时为(7.91±1.49)mg,明显高于常规培养组的(5.37±1.31)mg(P ＜0.05).ITS组细胞聚集体甲苯胺蓝染色和ColⅡ免疫组织化学染色明显强于常规培养组；2组软骨特异基因SRY相关高迁移组盒子基因9、ColⅡ表达相当,ITS组X型胶原表达减弱,核心蛋白和I型胶原表达增强.结论 ITS通过促进软骨细胞增殖和细胞外基质分泌可更好地促进组织工程软骨形成.
