Barth综合征3例临床表现及基因突变分析

目的：探讨Barth综合征(BTHS)的临床表现、诊断、治疗及转归。方法回顾性分析2013年6月至2014年10月经基因检测确诊的3例BTHS患儿的临床资料。结果3例患儿均为男性，其中2例为双胞胎。3例患儿均以心肌病和心功能不全为主要表现，同时合并不同程度的左室心肌疏松，其中2例诊断为左室心肌致密化不全(LVNC)；3例患儿均有运动发育迟缓和肌无力表现，生长发育落后；尿液3-甲基戊烯二酸(3-MGCA)水平显著增高，其中1例合并中性粒细胞减少；3例患儿均检测到TAZ基因突变，2例双胞胎患儿检测到1个新的错义突变c.527A＞G(p.H176R)，另外1例患儿检测到1个已知的无义突变c.367C＞T(p.R123X)，突变均来源于患儿母亲。随访过程中2例双胞胎分别于生后7个月和7个半月死亡，另1例目前存活。结论 BTHS是引起儿童心肌病的原因之一，对于合并有肌无力、中性粒细胞减少、3-甲基戊烯二酸尿症等表现的男性心肌病患儿，尤其是合并LVNC时，需要重视BTHS的筛查。

干扰TAZ基因对舌鳞癌细胞CAL27增殖凋亡的影响及其机制

目的 探讨干扰TAZ基因后对舌鳞癌细胞CAL27增殖和凋亡的影响以及可能的分子调控机制.方法 实验分为干扰组和对照组,将稳定干扰TAZ基因的慢病毒载体转染至舌鳞癌细胞CAL27中作为干扰组,并以非特异性序列转染CAL27细胞作为对照组.利用实时荧光定量PCR(RT-PCR)及Western blotting检测干扰效率,CCK-8细胞活力实验及EdU染色法检测转染后细胞增殖能力的改变,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡情况,Western blotting检测与周期及凋亡相关蛋白的表达情况.结果 干扰TAZ基因后,RT-PCR和Western blotting检测结果显示,TAZ mRNA和蛋白表达水平明显降低;CCK-8细胞增殖活力检测及EdU染色法显示细胞增殖能力降低;细胞早期凋亡和晚期凋亡比例均增多;G0/G1期细胞比例增多,而G2/M期细胞减少.同时,干扰TAZ基因后,周期相关蛋白CYCLIN D1、CDK4和CDK6等表达水平降低;而凋亡相关蛋白Bax、cleaved Caspase9表达水平均升高,Bcl-2表达水平降低.结论 干扰TAZ基因可以通过调控细胞周期和凋亡相关蛋白的表达,来影响舌鳞癌细胞的增殖和凋亡.

T AZ 基因重组质粒的构建与表达

目的：构建重组质粒TAZ‐pcDNA31．及 TAZ‐pEGFP‐C2，并应用Western Blot检测TAZ蛋白在细胞内的表达情况，初步探索TAZ分子促进细胞增殖和迁移的作用机制。方法通过PCR扩增获得 TAZ基因片段，胶回收后连接T载体，蓝白斑筛选，转化，提质粒，酶切，用T4 DNA Ligase连接，亚克隆进入pEGFP‐C2和pcDNA31．获得新的重组质粒，分别转染 HEK293细胞，智能型荧光细胞监测仪观察TAZ分子在细胞内的分布情况，Western Blot检测其在细胞内的表达情况。结果重组质粒经双酶切鉴定和测序证明构建成功，荧光照片显示 TAZ分子分布在细胞核和细胞浆中，Western Blot检测结果表明转染有重组质粒TAZ‐pcDNA31．的HEK293细胞中有大量T AZ蛋白表达。结论成功构建了两种重组质粒，并初步验证了T AZ蛋白的细胞定位，为进一步研究其促进增殖和迁移的作用机制奠定了基础。

Barth综合征1例

他莫昔芬对结直肠癌细胞HCT116凋亡的影响

目的 探讨他莫昔芬对结直肠癌细胞HCT116的凋亡作用及可能机制.方法 应用细胞计数法(CCK-8)试剂盒法观察1、3、10、30、100μmol/L他莫昔芬对结直肠癌细胞HCT116活性的影响,对照组加入5%DESO/EtOH溶液,应用流式细胞仪检测他莫昔芬介导的凋亡作用;RT-qPCR和Western blot检测他莫昔芬作用后HCT116细胞转录共刺激因子(TAZ)、Bcl-2和Bax基因和蛋白表达,并检测HCT116细胞Caspase-3活性的变化.结果 他莫昔芬能使HCT116细胞的活性下降,并且随着其浓度的升高,细胞的活性下降更明显.凋亡率在他莫昔芬组和对照组分别为(35.13±5.14)%和(11.70±1.72)%.他莫昔芬作用后HCT116细胞的TAZ和Bcl-2基因和蛋白表达显著下降,而Bax基因和蛋白表达上调,细胞Caspase-3的活性显著上升(P<0.05).结论 他莫昔芬作用于结直肠癌HCT116细胞后可以显著抑制细胞的增殖,并能促进细胞凋亡,其机制可能是通过降低TAZ、Bcl-2和增高Bax、Caspase-3来介导的.