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长链非编码RNA PANDAR促进结直肠癌转移的作用和机制研究
背景与目的:越来越多的研究表明,长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)在肿瘤发生、发展过程中有重要作用.LncRNA CDKN1A反义链启动子DNA损伤激动RNA(promoter of CDKN1A antisense DNA damage activated RNA,PANDAR)与多种肿瘤的进展及预后相关,在结直肠癌转移中的作用尚未得到证实.该研究旨在探索lncRNA PANDAR在结直肠癌中的功能,并对其作用机制进行初步探索.方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)检测lncRNA PANDAR在结直肠癌细胞及组织中的表达,并分析其表达水平与结直肠癌临床病理特征的关系.构建lncRNA PANDAR沉默(HCT116-shPANDAR)和高表达(DLD1-PANDAR)及其对照(HCT116-shNC、DLD1-vector)稳定转染细胞系.通过Transwell和Matrigel实验检测lncRNA PANDAR对细胞迁移和侵袭能力的影响.采用RTFQ-PCR检测lncRNA PANDAR表达改变后介导细胞上皮-间质转化能力的主要调控基因表达情况,并对目的基因在介导lncRNA PANDAR调控结直肠癌细胞转移中的作用进行验证.结果:LncRNA PANDAR在结直肠癌细胞中的表达明显高于结直肠正常上皮细胞;LncRNA PANDAR在结直肠癌组织中的表达明显高于癌旁组织[(171.52±97.80)%vs(100.00±63.18)%,P<0.05],且其表达水平与结直肠癌的TNM分期、淋巴结转移和远处转移相关(P<0.05).在Transwell及Matrigel实验中,lncRNA PANDAR沉默能够明显减弱结直肠癌细胞的迁移[100.00%vs(42.08±4.77)%,P<0.05]和侵袭[100.00%vs(39.14±3.81)%,P<0.05]能力,lncRNA PANDAR高表达能够明显促进结直肠癌细胞的迁移[100.00%vs(194.12±9.33)%,P<0.05]和侵袭[100.00%vs(204.08±12.27)%,P<0.05]能力.采用RTFQ-PCR检测lncRNA PANDAR表达改变后介导结直肠癌细胞上皮-间质转化的基因表达情况发现,锌指E-盒结合同源异形盒(zinc-finger E-box binding homeobox 1,ZEB1)表达与lncRNA PANDAR表达呈显著正相关;在lncRNA PANDAR高表达的细胞中干扰ZEB1表达能够明显逆转lncRNA PANDAR高表达引起的细胞迁移和侵袭能力的增强.结论:LncRNA PANDAR能够通过调控ZEB1表达进而促进结直肠癌转移,lncRNA PANDAR可能成为结直肠癌新的诊断指标及治疗靶点.
