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缺氧/放射活化Epo/e9增强子调控layilinsiRNA表达以抑制人肺腺癌A549细胞侵袭的研究
背景与目的:Layilin是一种新发现与肺腺癌侵袭转移有密切联系的特异性透明质酸受体.本研究旨在观察缺氧/放射条件下活化缺氧/放射双敏感性增强子(Epo/e9),调控针对layilin的小干扰RNA (small interfering RNA,siRNA)表达,探讨其对人肺腺痛A549细胞受透明质酸诱导侵袭的影响.方法:构建携带Epo/e9增强子和U6启动子且表达针对layilin的siRNA的RNA干扰载体(Epo/e9-siLay plasmid)和阴性对照RNA干扰载体(Epo/e9-siCtrl plasmid),分别转染A549细胞,新霉素抗性筛选得到layilin表达受抑制的A549Epo/e9-siLay细胞和layilin表达未受影响的A549Epo/e9-siCtrl细胞.针对非转染A549(A549untransfected)、A549EPo/e9-SiLay、A549Epo/e9-siCtrl三组细胞,在缺氧/放射处理下,分别采用RT-PCR和Western blot检测layilin mRNA和蛋白表达,用Transwell模型检测细胞侵袭能力.结果:与A549untransfected组相比,A549Epo/e9-siLay组layilin表达显著减弱(P＜0.01),Transwell穿膜细胞数显著减少(P＜0.01)；A549Epo/e9-siCtrl组layilin表达、Transwell穿膜细胞数皆和A549untransfected组无显著差异(P＞0.05).缺氧/放射处理能进一步增加RNA干扰的上述效应(P＜0.01).结论:在缺氧/放射条件下,Epo/e9增强子调控layilin siRNA表达能明显抑制A549细胞侵袭行为.
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RNAi抑制Layilin表达对肺腺癌A549细胞体外侵袭和荷瘤鼠体内淋巴转移的影响
背景与目的:透明质酸参与了多种肿瘤细胞的侵袭行为,Layilin是一种新发现的特异性透明质酸受体.本研究在发现Layilin表达于人肺腺癌A549细胞株的前期工作基础上,观察用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术抑制Layilin表达后,对人肺腺癌A549细胞体外侵袭和体内淋巴道转移的影响.方法:构建能表达针对Layilin的小干扰RNA(small interfering RNA,si-RNA)的RNAi质粒(Layilin siRNA plasmid)和表达不针对任何已知mRNA的siRNA的阴性对照RNAi质粒(control siRNA plasmid),分别转染A549细胞,新霉素抗性筛选得到Layilin表达受抑制的A549-siLayilin细胞和Layilin表达未受影响的A549-siControl细胞.针对非转染(A549-nontransfection)、A549-siLayilin、A549-siControl 3组细胞,分别采用RT-Real time PCR和Western blot技术检测Layilin表达,用Boyden小室实验检测细胞体外侵袭能力,用爪垫皮下种植淋巴结转移模型检测淋巴转移能力.结果:与A549-nontransfection组和A549-siControl组相比,A549-siLayilin组细胞Layilin表达减少,体外侵袭能力降低,体内淋巴转移率下降.结论:通过RNAi抑制Layilin表达后,能有效抑制透明质酸所诱导的A549细胞体外侵袭和裸鼠移植瘤淋巴转移.本研究为通过RNAi手段抑制Layilin表达,进而抑制肺腺癌淋巴转移提供了有益的思路.
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针对layilin的shRNA抑制透明质酸诱导人肺腺癌A549细胞体外黏附和侵袭
背景与目的透明质酸参与了多种肿瘤细胞黏附侵袭行为.layilin是一种新发现的与细胞骨架有密切联系的透明质酸受体.本研究的目的是观察针对layilin的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)对体外培养的人肺腺癌A549细胞layilin表达及受透明质酸诱导黏附侵袭行为的影响.方法设计和构建带有U6启动子的能产生针对layilin的shRNA的RNA干扰质粒,转染至A549细胞,以RT-PCR、Western blot和免疫荧光检测A549细胞转染前后layilin表达,以平板黏附模型和Boyden小室模型检测A549细胞转染前后黏附和侵袭能力.结果和转染前相比,转染了RNA干扰表达质粒的A549细胞layilin表达明显减少(P＜0.01),而且受透明质酸诱导而黏附于平板和穿过Boyden小室隔膜的A549细胞数皆明显减少(P＜0.01).结论针对layilin的shRNA能明显抑制透明质酸诱导的人肺腺癌A549细胞体外黏附和侵袭能力.
