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肝素酶介导的肝癌细胞与血管内皮细胞黏附及穿内皮迁移
目的:探讨肝素酶(heparanase,HPSE)对肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCc)细胞与血管内皮细胞黏附及穿内皮迁移的影响.方法:选用人正常脐静脉内皮细胞株HUVEC-C,肝LO-2细胞,肝癌HepG2、BEL-7402和HCCLM3细胞,用Real-time PCR筛选高表达HPSE的HCC细胞;设计4个HPSE基因RNA干扰(RNA interference,RNAi)序列、构建质粒,并筛选出优RNAi质粒;用该RNAi质粒转染高表达HPSE的HCC细胞,同时设空白对照组、阴性对照组和未转染的HCC细胞组;黏附试验观察各组HCC细胞与HUVEC-C细胞的黏附情况;Transwell小室法观察HCC细胞穿HUVEC-C细胞迁移情况;癌细胞均以0.25％玫瑰红染色、光镜下观察;酶标仪法分别测定脱色后各组细胞D值并分析比较.结果:HCCLM3细胞HPSEmRNA表达水平显著高于肝LO-2、HepG-2和Bel-7402细胞[(5.72±0.62) vs (1.05 ±0.09)、(2.65±0.31)和(3.43±0.58),均P＜0.01)l;设计的4个HPSE之RNAi载体,以siHPSE-3158对HPSE基因表达的抑制效果佳(P＜0.05).RNAi组HCCLM3细胞与HUVEC-C细胞黏附率显著低于空白对照组、阴性对照组和未转染的HCCLM3细胞组[(0.31 ±0.04) vs (0.46±0.06)、(0.45 ±0.05)和(0.64±0.09),均P＜0.01)].RNAi组HCCLM3细胞穿HUVEC-C细胞迁移率也显著低于空白对照组、阴性对照组和未转染的HCCLM3细胞组[(0.28 ±0.03) vs (0.41 ±0.04)、(0.41±0.05)和(0.43±0.05),均P＜o.05)].结论:HPSE参与介导HCC细胞与血管内皮细胞的黏附及HCC细胞穿内皮迁移,可能是HCC微血管捕获、血行转移的重要因素.
