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IGF-1R抑制剂NVP-AEW541对卵巢癌移植瘤中休眠细胞的作用
目的:探讨胰岛素样生长因子1受体(insulin-like growth factor-1 receptor,IGF-1R)抑制剂NVP-AEW541对卵巢癌移植瘤中休眠的SKOV3-PK-H26hi细胞增殖和凋亡的影响,以及其可能的作用机制.方法:应用CCK-8法检测不同浓度的NVP-AEW541(1、5、10和15 μmol/L)对SKOV3-PKH26hi细胞增殖的影响.NVP-AEW541处理SKOV3-PKH26hi细胞48 h后,应用FCM法检测细胞周期及细胞凋亡.蛋白质印迹法检测NVP-AEW541对SKOV3-PKH26hi细胞中细胞周期蛋白D1 (cyclin Dl)、caspase-3、Bcl-2、Bax、磷酸化蛋白激酶B(phosphoprotein kinase B,p-PKB,又称p-Akt)、磷酸化IGF-1R(phospho-IGF-1R,p-IGF-1R)及磷酸化糖原合成酶激酶-3β (phospho-glycogen synthase kinase-3β,p-GSK-3β)蛋白表达的影响.结果:NVP-AEW541可抑制SKOV3-PKH26hi细胞增殖,呈剂量和时间依赖性(P值均＜ 0.01).NVP-AEW541将SKOV3-PKH26hi细胞阻滞于G0/G1期,并促进细胞早期凋亡和晚期凋亡(P值均＜0.01).与对照组(SKOV3-PKH26hi细胞未进行任何处理)比较,NVP-AEW541明显下调SKOV3-PKH26hi细胞中cyclin D1和Bcl-2蛋白表达水平(P值均＜0.05),明显上调caspase-3和Bax蛋白表达水平(P值均＜0.05),p-IGF-1R、p-Akt和p-GSK-3β的表达水平也明显下调(P值均＜0.01).结论:IGF-1R抑制剂NVP-AEW541可以通过下调Akt的磷酸化水平,抑制SKOV3-PKH26hi细胞增殖,并促进细胞凋亡.
关键词： 卵巢肿瘤 生长调节素类 细胞增殖 休眠细胞 NVP-AEW541 -
用于逆转卵巢癌耐药的HMSN复合载药系统的研究
目的:构建介孔二氧化硅(HMSN)复合载药系统,探究该系统对卵巢癌耐药细胞株SKOV-3/ADR耐药的逆转作用.方法:在HMSN表面修饰羧基,通过机械搅拌和静电吸引的作用包载ADR和荧光NVP;采用Zeta电位、透射电镜等方法对此系统进行表征,并测定此系统的包封率和载药量以及在不同pH值环境中的药物释放率;再将实验分为两组,即HMSN-COOH@ADR荧光NVP组和游离ADR荧光NVP组,采用荧光共聚焦观察不同时间点HMSN复合载药系统在胞内的蓄积情况;利用MTT法检测细胞在两组作用24 h后的抑制率,同时通过流式细胞分析仪检测两组的凋亡率.结果:Zeta电位表明HMSN在修饰羧基之前其所带电荷约为-20 mV,在修饰羧基后HMSN所带电荷增加至约-40 mV;通过透射电镜表明此载药系统在包载药物前后的形态和粒径均未发生明显改变;测定HMSN复合载药系统中ADR的包封率为45%,载药量为7.5%,荧光NVP的包封率为30%,载药量为1.4%.HMSN复合载药系统的药物释放率随着环境pH值的降低而逐渐升高,具有显著的pH敏感性,实现了以HMSN所处环境的pH值为"开关"调控药物的释放,有效地减少了复合载药系统在胞外的非特异性释放;通过荧光共聚焦观察发现HMSN复合载药系统作用细胞1 h后,其在胞内的蓄积量即可明显增加,随着作用时间的延长胞内的荧光强度也在逐渐增强;药物作用相同的时间,HMSN-COOH@ADR荧光NVP组较游离ADR荧光NVP组的MTT细胞抑制率和细胞凋亡率均明显提高(P<0.05),对细胞的毒性作用明显增强.结论:构建的HMSN-COOH@ADR荧光NVP的复合载药系统可以有效逆转卵巢癌耐药细胞株SKOV-3/ADR的耐药性,其逆转耐药的机制是通过非特异性的内吞途径携带复合载药系统进入细胞内,逃避了P-gp等ABC运载蛋白超家族的识别和外排作用.
关键词： 卵巢癌 多药耐药 介孔二氧化硅 NVP-AEW541 -
IGF信号轴在卵巢癌干细胞样细胞增殖状态转换及预防卵巢癌复发中的作用
目的:探究胰岛素样生长因子(IGF)信号轴在促进卵巢癌干细胞样细胞增殖和抗凋亡中的作用,探讨基于IGF信号轴的IGF-1R抑制剂的靶向治疗和寻求降低卵巢癌化疗后复发的可能途径.方法:采用CD117+ CD44+ A2780卵巢癌细胞株,使用免疫细胞化学的方法检测IGF信号轴中IGF-1、IGF-2和IGF-1R在CD117+ CD44+ A2780细胞中的表达;利用MTT法检测IGF-1对CD117+ CD44+ A2780细胞的促增殖活性,配制IGF-1的质量浓度分别为10、25、40、55 ng· ml-1,另设空白对照,从中筛选出加入外源IGF-1的适宜质量浓度用于后续实验中;再将实验分为3组,即IGF-1刺激组、NVP抑制组和空白组.通过流式细胞术检测3组细胞在药物处理48 h后的细胞周期分布和凋亡率情况.结果:IGF信号轴组件IGF-1、IGF-2和IGF-1R均表达在CD117+ CD44+ A2780细胞的细胞膜上和细胞质中;MTT检测发现当外源IGF-1质量浓度为40 ng·ml-1时对CD117+ CD44+ A2780细胞的促分裂增殖作用明显;IGF-1刺激组较空白组增殖明显活跃,凋亡率降低(P ＜0.05);NVP抑制组较空白组增殖明显减少,凋亡率增高(P＜0.05).结论:IGF信号轴与卵巢癌化疗后的复发密切相关,IGF-1在卵巢癌干细胞样细胞转换增殖状态和对抗凋亡中发挥着重要作用;NVP阻断IGF-1R的作用可有效抑制卵巢癌干细胞样细胞从休眠状态启动分裂增殖;IGF信号轴组件可作为卵巢癌治疗及化疗后预防复发的靶点.
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IGF-1R抑制剂NVP-AEW541在肾上腺皮质癌SW13细胞系中的作用
目的 通过细胞实验,探寻IGF-1R抑制剂NVP-AEW541阻断IGFR信号通路的激活,评价其对SW13细胞增殖、凋亡的影响情况.方法 通过MTT试验观察细胞增殖,通过流式细胞仪检测细胞凋亡的改变,通过Western blot检测IGFR下游信号通路成员ERK和mTOR的表达情况.结果 NVP-AEW541可以呈浓度-时间依赖性抑制细胞增殖、呈浓度依赖性促进细胞早期凋亡和晚期坏死,并下调p-AKT的表达水平,而不影响mTOR的磷酸化水平和RAS/RAF/ERK信号传导通路.结论 IGF-1R抑制剂NVP-AEW541可以通过下调AKT的磷酸化水平,从而抑制细胞增殖、促进细胞凋亡,具有潜在的抗肿瘤作用.
关键词： SW13 NVP-AEW541 胰岛素样生长因子 PI3K信号通路
