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沉默ESRP1基因表达对卵巢癌OVCAR5细胞中FGFR2亚型转化的影响
目的:研究沉默上皮剪接调节蛋白1(epithelial splicing regulatory protein 1,ESRP1)基因表达对卵巢癌OVCAR5细胞中成纤维细胞生长因子受体2(fibroblast growth factor receptor 2,FGFR2)亚型转换的影响.方法:构建靶向ESRP1基因的ESRP1-shRNA慢病毒表达载体(pLVTHM/ESRP1-shRNA1和pLVTHM/ESRP1-shRNA2), 同时设置阴性对照(negative control,NC)质粒(pLVTHM/NC-shRNA);将3种质粒分别转染到293T细胞中制备慢病毒.慢病毒感染卵巢癌OVCAR5细胞后,分别采用实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测ESRP1 mRNA及蛋白的表达水平;采用限制性内切酶AvaⅠ和HinC Ⅱ检测沉默ESRP1基因后对FGFR2亚型转换的影响;MTT法检测沉默ESRP1基因后对OVCAR5细胞增殖的影响;蛋白质印迹法检测上皮标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)、间质标志物N-钙黏蛋白(N-cadherin)及β-链蛋白(β-catenin)表达的变化.结果:成功构建靶向ESRP1基因的shRNA慢病毒表达载体并包装获得慢病毒;与阴性对照组比较,靶向ESRP1基因的shRNA能明显抑制OVCAR5细胞中ESRP1 mRNA及蛋白的表达(P值均＜0.05);沉默ESRP1基因的表达能诱导OVCAR5细胞中FGFR2由上皮亚型(FGFR2b)向间质亚型(FGFR2c)的转换,并促进OVCAR5细胞的增殖(P＜0.05);同时,下调E-cadherin的表达水平而上调N-cadherin的表达水平,并激活β-catenin (P值均＜0.05).结论:沉默ESRP1基因表达能诱导OVCAR5细胞中FGFR2亚型的转换,促进OVCAR5细胞增殖,并诱导OVCAR5细胞发生上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT),该过程可能涉及Wnt/β-catenin信号通路.
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ESRP1在直肠癌细胞上皮间质转化中的作用
目的 分析上皮剪接调节蛋白1(ESRP1)在直肠癌组织及细胞系中的相对表达水平,以及ESRP1对直肠癌细胞上皮间质转化(EMT)中的作用及其机制.方法 采用Western blot检测ESRP1在42例直肠癌组织和癌旁正常组织中的表达水平;利用Western blot检测ESRP1在直肠癌细胞及人正常结肠上皮细胞中的表达;将ESRP1 mimic或mimic NC瞬时转染SW480细胞后,Transwell实验检测细胞侵袭;Western blot法检测瞬转ESRP1 mimic后对ESRP1、E-cadherin、N-cadherin、Snail和Twist蛋白表达的影响.结果 与癌旁正常组织相比,ESRP1在直肠癌组织中的相对表达水平明显下调(P<0.01),ESRP1的表达与直肠癌的淋巴结转移相关;与NCM460细胞相比较,ESRP1在直肠癌细胞株中的表达量均显著下调(P<0.01);ESRP1mimic转染SW480细胞后可抑制SW480细胞侵袭,同时上调E-cadherin的表达,并下调N-cadherin、Snail和Twist蛋白在SW480细胞内的表达.结论 ESRP1在直肠癌组织和细胞系中的表达均显著下调,ESRP1与直肠癌细胞EMT明显相关.
