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Free-Style 293-F细胞文献资料
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人源DKK1真核悬浮分泌表达系统的建立及其特异性抗体的制备和鉴定
目的:利用哺乳动物细胞悬浮培养表达系统分泌表达人源Dickkopf-1(DKK1)蛋白,纯化蛋白并制备特异性抗体.方法:构建DKK1真核表达载体pCMVcStrep-DKK1,并借助脂质体将载体瞬时转染入Free-Style293-F细胞(无血清培养),ELISA和蛋白印迹法检测DKKl蛋白表达量.利用亲和层析法纯化DKK1蛋白,Wnt信号通路荧光素酶报告系统检测其生理活性.以纯化的DKKl蛋白免疫BALB/c小鼠获得相应抗体,并初步鉴定其抗原特异性.结果:DKK1蛋白分泌表达在Free-Style 293-F细胞培养液中,蛋白浓度在转染后第5天达高(20 mg/L).所纯化的DKK1蛋白能够抑制Wnt3a蛋白诱导的报告基因的表达.抗DKK1小鼠抗体能特异性识别细胞内源性DKKl蛋白.结论:建立了在哺乳动物细胞悬浮培养系统中高效分泌表达人源DKK1重组蛋白的表达系统,并获得相应的特异性抗体,为其下一步结构与功能研究及在肿瘤中的应用奠定了实验基础.
