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miR-149在口腔鳞癌细胞株KB中的表达及其对MMP-9的靶向调节作用
目的:探讨miR-149通过靶向调节基因对口腔鳞癌细胞生长和侵袭的影响.方法:以实验室过微阵列芯片技术筛选出的miR-149作为本实验研究对象,通过靶基因预测软件,选定基质金属蛋白酶-9(MMP-9)为其靶基因,利用实时定量PCR(RT-PCR)检测口腔鳞癌和癌旁组织中miR-149和MMP-9 mRNA的表达水平. 瞬时转染miR-149 mimics、miR-149 mimics control、MMP-9siRNA和MMP-9 siRNA阴性对照,通过PT-PCR及Western blotting 检测口腔鳞癌KB细胞系中miR-149与MMP-9的关系.运用平板克隆形成和Transwell侵袭实验检测MMP-9对口腔鳞癌KB细胞生长和侵袭的影响. 结果:在口腔鳞癌中miR-149的表达明显低于癌旁组织(P<0.01),MMP-9 mRNA的情况则相反(P<0.01). 瞬时转染后应用RT-PCR及Western blotting 检测提示,miR-149与MMP-9表达成反比,差异具有统计学意义(P<0.05),说明二者之间有靶向调节关系. 与对照组细胞相比,转染MMP-9 siRNA的口腔鳞癌KB细胞克隆数目减少(P<0.05),发生侵袭的细胞减少(P<0.05). 结论:miR-149通过靶向调节MMP-9的表达,抑制口腔鳞癌细胞的生长和侵袭,发挥着抑癌基因的作用,可望作为口腔鳞癌分子治疗的有效靶点.
关键词： 口腔鳞癌 靶向调节 microRNA-149 基质金属蛋白酶-9 -
食管癌中MicroRNA-149与DNA聚合酶β的靶向关系
目的:探讨食管癌中miR-149与DNA聚合酶β(polβ)的靶向关系.方法:采用实时荧光定量PCR方法,分析64对食管癌及其癌旁正常组织中polβmRNA和miR-149的表达水平.采用TargetScan和miRanda进行生物信息学分析,预测miR-149和polβ的结合位点.采用Western blot法检测未转染的EC9706细胞及miR-149 mimics、miR-149 scramble转染细胞中polβ蛋白的表达.构建野生型polβ3'UTR表达质粒pmirGLO-Wt-polβ3'UTR,检测miR-149 mimic或miR-149 scramble与重组质粒共转染的EC9706细胞中的荧光素酶活性.结果:与癌旁正常组织比较,食管癌组织中polβmRNA表达水平升高,miR-149表达水平降低,两者表达呈负相关(r=-0.671,P<0.05).miR-149 mimics转染组细胞中polβ蛋白表达水平低于miR-149 scramble转染组和未转染组(P<0.05).miR-149 mimic与重组质粒共转染组细胞中的荧光素酶活性低于miR-149 scramble与重组质粒共转染组(P<0.05).结论:食管癌中polβ是miR-149的靶基因,miR-149可通过结合polβ3'UTR下调polβ的表达水平.
关键词： 食管癌 microRNA-149 DNA聚合酶β
