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变异链球菌表面蛋白PAcP与霍乱毒素B亚单位融合基因在转基因番茄中的表达
目的:在获得含编码变异链球菌表面蛋白PAcP和霍乱毒素B亚单位融合基因的转基因番茄原代种子的基础上,应用分子生物学技术检测外源基因在转基因植株中的表达,测定目的蛋白的含量.方法:PCR筛选含编码变异链球菌表面蛋白PAcP与霍乱毒素B亚单位融合基因的转基因番茄植株;提取番茄果实总蛋白,用BCA试剂盒测定番茄果实总蛋白含量;通过Western印迹检测外源蛋白的表达情况,并用ELISA法对外源目的蛋白含量进行测定.结果:PCR扩增分析可见1.6 kb特异性扩增条带,出现特异性条带的植株占总检测植株的55.6％;转基因番茄总蛋白含量为3.93 mg/mL,Western印迹结果显示,在PVDF膜上,约60 kD处出现特异性条带;ELISA测得表达的目的蛋白占番茄可溶性总蛋白的0.18％.结论:含编码变异链球菌表面蛋白PAcP和霍乱毒素B亚单位融合基因的转基因番茄子代植株能有效表达外源蛋白.
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转基因番茄可食用防龋疫苗免疫BALB/c小鼠的实验研究
目的:观察含PAcA/CTB的转基因番茄可食用防龋疫苗的免疫原性及免疫反应性.方法:将18只6～8周龄的雄性BALB/c小鼠,随机分为3组,每周分别灌胃含有PAcA/CTB嵌合蛋白的转基因番茄果汁(实验组)、非转基因番茄果汁(阴性对照组)、灭活全菌疫苗(阳性对照组).于首次免疫前和免疫后第1、2、3、4周采集血液、唾液样品.ELISA检测其血清和唾液样本中的抗变异链球菌PAcA的IgG、IgA抗体效价.结果:阳性对照组和实验组小鼠血液和唾液中特异性抗体从免疫后1周开始升高,初始免疫后第4周达高峰,分别与阴性对照组比较存在统计学差异(P＜0.05或P＜0.01).免疫后第2、3、4周阳性对照组与实验组差异有统计学意义(P＜0.05).结论:转基因番茄所表达的外源目的蛋白具有抗原性,能够诱导BALB/c小鼠产生免疫应答.
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转基因番茄可食用防龋疫苗免疫BALB/c鼠的实验初探
目的:观察转基因番茄可食用疫苗的免疫原性和免疫反应性.方法:将60只60 d龄的雌性BALB/c小鼠随机分为4组,分别口服或腹膜下注射转基因番茄或对照番茄.35 d后取小鼠血清样本,用ELISA的方法检测其血清样本中的抗变形链球菌PAc的IgG抗体效价.结果:口服和腹膜下注射转基因番茄组小鼠的血清中均出现了抗PAc的IgG抗体,分别与对照组相比具有统计学差异(P＜0.05),且口服转基因番茄组与注射转基因番茄组的小鼠血清抗体水平无统计学差异(P＞0.05).结论:转基因番茄所表达的外源蛋白具有抗原性,能够诱导实验动物产生免疫应答.
