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RNA水解酶文献资料
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核酸提取方法的改进
实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)广泛应用于RNA病毒的核酸检测,而前期的RNA提取效率高低直接影响到检测效率,以往病毒RNA提取主要采用异硫氰酸胍-酚-氯仿及TRIzol法[1-3]等,但操作步骤都较繁琐,且易造成污染而出现假阳性.近些年,公共卫生紧急事件频发,国内市场一直致力于探索提取效率高、耗时短、成本低的病毒RNA提取试剂的研发.RNA易被RNA水解酶(RNase)水解,排除RNase的污染是RNA制备成功与否的关键因素,RNase的生物活性非常稳定,加热煮沸均不能使其完全失活,冰浴条件下操作是减低RNase活性的有效措施[4],而一些国产试剂及我们实验室使用的德国罗氏公司的RNA提取试剂在RNA提取操作过程中有72℃放置10min的温浴操作一步,其意义不甚明瞭,而这步操作不仅费时,在温浴过程中还易产生气溶胶、试管爆盖等因素,增加了实验过程中实验室污染的几率.因此,我们进一步做了比对试验,比较改进后的方法与原试剂说明书中方法的检测结果,以验证72℃放置10min的温浴操作的意义,现将结果报告如下.
