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T-A克隆法文献资料
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BCR/ABL重组质粒实时荧光定量PCR标准品的制备
目的:用T-A克隆法构建含BCR/ABL融合基因的重组质粒,并用实时定量PCR(RQ-PCR)方法制备标准品.方法:通过培养细胞,提取总RNA并逆转录为cDNA后做PCR,电泳胶回收纯化,T-A克隆与pUCm-T载体连接,转染DHSa菌,蓝白斑筛选阳性菌落后,大量提取质粒,再进行RQ-PCR,后制得BCR/ABL的重组质粒标准品.结果:蓝白斑筛选实验、PCR扩增均证实BCR/ABL融合基因重组到pUCm-T载体上,经RQ-PCR定量后得到BCR/ABL重组质粒标准品的标准曲线.结论:该方法能大量制备质粒标准品,并且可被推广应用.
关键词： Bcr/abl融合基因 pUCm-T载体 T-A克隆法 实时定量PCR
