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Dok1与TrkA之间相互作用的酵母双杂交研究
目的:研究downstream of kinases1(dok1)与TrkA之间的相互作用,寻找TrkA的可能底物或调控蛋白,以深入认识TrkA下游信号转导机制.方法:将TrkA胞内域与LexA蛋白融合作为DNA结合蛋白,分别将dok1、dok1PTB及dok1ΔPTB与B42AD蛋白融合作为激活域蛋白,共转化酵母菌后,通过β-半乳糖苷酶活性检测以及氨基酸营养缺陷生长实验分析它们之间的相互作用.结果:dok1及dok1PTB与TrkA之间在酵母中存在结合,而dok1ΔPTB不与TrkA结合.结论:证实TrkA与dok1之间具有相互作用,dok1的PTB结构域在介导此相互作用的过程中非常重要.
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Dok1与表皮生长因子受体之间相互作用的酵母双杂交研究
目的:研究downstream of kinases(dok1)与表皮生长因子受体(EGFR)之间的相互作用,寻找EGFR的可能底物或调控蛋白,以深入认识EGFR下游信号转导机制.方法: 将EGFR胞内域与LexA蛋白融合作为DNA结合蛋白,分别将dok1、dok1PTB及dok1ΔPTB与B42AD蛋白融合作为激活域蛋白,共转化酵母菌后,通过β-半乳糖苷酶活性检测、生长实验以及免疫共沉淀实验分析它们之间的相互作用.结果: dok1及dok1PTB与EGFR之间在酵母中存在结合,而dok1ΔPTB不与EGFR结合. 结论: 首次证实EGFR与dok1之间具有相互作用,dok1的PTB结构域在介导此相互作用的过程中非常重要.
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表皮生长因子受体与Dok1 PTB结构域结合关键位点的确定
目的:确定表皮生长因子受体(EGFR)与Dok1 PTB结构域结合的关键氨基酸残基位点.方法:合成包含磷酸化的酪氨酸残基的EGFR胞内域的5个小肽片段,利用谷胱苷肽S转移酶共沉淀技术确定能够抑制Dok1 PTB结构域与激活的EGFR结合的小肽.结果:pY1086或pY1148小肽能抑制激活的EGFR与Dok1 PTB结构域的结合.结论:pY1086和pY1148是激活的EGFR与Dok1 PTB结构域结合的关键位点.
关键词： EGFR Dok1 谷胱苷肽-S转移酶共沉淀
