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肾组织肌纤维、胶原纤维、肾小球基膜和细胞的组合染色法研究
目的:探讨显示人体和实验动物肾组织中的肌纤维、胶原纤维、肾小球基膜和红细胞等成分的复合染色法.方法:选用Periodic acid-Schiff-Orange G-Iodine green(高碘酸、雪夫、橙黄G和碘绿,简称PA-S-O-IG)组合染色法,Sirius red-Picricacid-Iodine green(天狼星红、苦味酸和碘绿,简称SR-PA-IG)组合染色法和改进的Masson组合染色法对肾组织中的多种成分进行染色.结果:PAS-O-IG法显示肾小球基膜黏多糖呈紫红色,细胞核呈绿色,红细胞呈黄色.SR-PA-IG法显示肾小球基膜和囊壁纤维组织增生的胶原纤维呈红色,细胞核呈淡绿色,背景呈黄色.Masson法显示肾小球和小管等胶原纤维呈绿色或蓝色,红细胞呈橙红色,血管和间质的平滑肌纤维呈红色.结论:3种组合染色方法,克服了原法染色单一、对比效果差的缺点,能够更好地显示肾组织中的血管和间质平滑肌纤维、肾小球基膜和囊的黏多糖,细胞核和红细胞、肾小球和肾小管的胶原纤维和细胞核等成分,为肾脏疾病形态学诊断和研究,提供了较为理想的组合染色法.
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糖尿病肾病肾小球滤过膜结构与肾功能及代谢指标的关系
目的:观察2型糖尿病肾病(T2DN)患者肾小球滤过膜超微结构改变与肾功能及代谢指标的关系.方法:将明确诊断的T2DN 75例患者分为:微量白蛋白尿组(尿白蛋白/24h 30～300 mg);蛋白尿组(尿蛋白0.5～2.0g/24h)和大量蛋白尿组(尿蛋白＞3.5g/24h).收集三组患者临床指标,并分别使用Cockcroft-Gault公式、简化的肾脏疾病饮食控制(MDRD)公式等计算患者的肾小球滤过率(eGFR);采用形态学计量分析方法分别测算肾小球体积、肾小球足细胞和内皮细胞的相对密度、绝对数目和足细胞足突宽度及肾小球基膜(GBM)厚度.结果:(1)肾小球滤过膜结构与GFR的关系:微量白蛋白尿组Ccr与肾小球足细胞密度及数日均负相关(分别为r=-0.480,P＜=0.05;r=-0.478,P＜0.05);大量蛋白尿组以SCr估算的eGFR与肾小球足细胞密度正相关(r=0.462,P＜0.05);余均未见明显相关.(2)多元回归分析结果:微量白蛋白尿组中肾小球足细胞密度、糖化血红蛋白、三酰甘油、尿酸与Ccr相关(R~2=0.616,P＜0.01);大量蛋白尿组肾小球足细胞密度、尿酸与以SCr估算的eGFR相关(R~2=0.613,P＜0.01).(3)肾小球滤过膜结构及肾小球体积与糖、脂质代谢指标的关系:①肾小球体积与血糖的关系:微量白蛋白尿组中肾小球体积和糖化血红蛋白正相关(r=0.425,P＜0.05);而在蛋白尿组则为负相关(r=-0.427,P＜0.05).②GBM厚度与血糖、血脂代谢指标的关系:微量白蛋白尿组中,以GBM厚度为因变量,糖及脂质代谢水平为自变量,可见空腹血糖水平和总胆固醇与基膜厚度相关(R~2=0.247,P＜0.05).结论:肾小球滤过膜结构与GFR及糖、脂质代谢水平间存在着密切联系,且与DN发展的不同阶段相关.
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糖尿病肾病肾小球滤过膜超微结构改变及其与蛋白尿的关系
目的:观察2型糖尿病肾病(2TDN)患者肾小球滤过膜超微结构变化特点及与蛋白尿的关系. 方法:将明确诊断的2TDN患者分为微量白蛋白尿组(尿白蛋白/24 h 30～300 mg);蛋白尿组(尿蛋白0.5～2.0g/24h)和大量蛋白尿组(尿蛋白>3.5 g/24h).收集三组患者临床指标,并分别观察各组患者肾活检组织学及肾小球滤过膜超微结构变化,采用形态学计量分析方法分别测算肾小球体积、肾小球足细胞和内皮细胞的相对密度、绝对数目和足细胞足突宽度及肾小球基膜(GBM)厚度. 结果:三组患者的年龄、性别、BMI、血压和糖尿病及肾脏病病程均无统计学差异.2TDN患者肾组织超微结构定量分析结果证实:(1)2TDN患者在微量白蛋白尿期肾小球毛细血管袢内皮细胞数目就已增加(实验组vs对照组P<0.01),内皮细胞相对密度则维持在一定水平(各组间P>0.05);(2)GBM改变包括三层结构消失、GBM增厚等,这些改变在微白蛋白尿期就已发生,且GBM与病程密切相关(蛋白尿组,r=0.538,P<0.05).(3)微量白蛋白尿组患者肾小球足细胞相对密度下降(微量白蛋白尿组vs对照组P<0.01)、足细胞足突宽度增加(微量白蛋白尿组vs对照组P<0.05).随病程进展,足细胞相对密度和绝对数目呈进行性减少(微量白蛋白尿组vs大量蛋白尿组P<0.05).(4)2TDN患者蛋白尿水平与肾小球足细胞数目(大量蛋白尿组,r=0.648,P<0.01)及GBM厚度(蛋白尿组,r=0.538,P<0.05)相关. 结论:DN患者肾小球滤过膜超微结构发生了系列变化,这些变化与蛋白尿的发生、发展有着内在联系.
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肾小球基膜Ⅳ型胶原亚链定量分析在Alport综合征诊断中的意义
目的:通过对肾组织Ⅳ型胶原亚链免疫组化染色未见异常的Alport综合征(AS)患者进行Ⅳ型胶原亚链构成比的定量分析,探讨不典型AS的发病机制,提高AS的诊断水平.方法:选取临床、病理及电镜符合AS、但肾组织Ⅳ型胶原亚链染色未见异常的患者14例,运用免疫荧光双套色法,通过激光共聚焦荧光显微镜定量分析肾小球基膜(GBM)Ⅳ型胶原中α3链、α5链的含量.并选取4例薄基膜肾病及10例肾活检病理诊断为轻度系膜增生性病变(MsPGN)患者的组织切片作为对照.结果:入选的14例患者在电镜下皆以GBM病变为主.通过定量分析GBMⅣ型胶原亚链构成比,我们发现,AS患者GBM α3链和α5链在Ⅳ型胶原总体分布中所占的比例明显减少(P＜0.05,P＜0.01 vsMsPGN).根据肾组织Ⅳ型胶原亚链构成比的不同,可以将这14例患者分为三组:①2例患者α5链/Ⅳ型胶原比值降低,α3链/Ⅳ型胶原比值正常.这组患者男女各1例,无明确家族史;②9例患者α3/Ⅳ及α5/Ⅳ比值同时降低.这组患者女性发病明显多于男性,家系分析显示遗传方式为X性连锁显性遗传.③3例患者α3/Ⅳ及α5/Ⅳ比值皆正常.这组患者男性2例,女性1例.家系分析显示遗传方式亦为X性连锁显性遗传.我们还发现,蛋白尿的发生与α5链/Ⅳ型胶原比值的降低程度密切相关,存在蛋白尿的患者其α5链/Ⅳ型胶原比值(0.72±0.11)明显低于无蛋白尿的患者(0.96±0.094)(P＜0.01).与AS患者不同的是,4例薄基膜肾病患者无一例出现α3链/Ⅳ型胶原和α5链/Ⅳ型胶原比值的降低.结论:对于部分AS患者,虽然肾组织Ⅳ型胶原亚链染色未见异常,但Ⅳ型胶原各亚链的构成比已发生变化,表现为Ⅳ型胶原α3链和(或)α5链在Ⅳ型胶原总体分布中的比例降低.该发现不仅加深了我们对AS患者发病机制的认识,同时也表明对肾小球基膜Ⅳ型胶原亚链构成比进行定量分析是诊断不典型AS的一个重要手段.
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薄基膜肾病
病例摘要病史患者女性,13岁,因"持续镜下血尿两年余"2005年3月笔院.两年前患儿上呼吸道感染后家人觉得其颜面浮肿,当地医院查尿常规隐血3+,蛋白定性阴性,静滴青霉素7天后复查尿常规隐血仍2+.此后曾反复间断服用六味地黄丸和多种中药汤剂(成份不详),尿隐血仍持续不减(2+).病程中否认肉眼血尿,尿中无血块,无尿路刺激症状,亦无皮疹、关节痛,血压正常,尿量无变化,肾功能正常.为明确诊断笔院.
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层粘连蛋白α2亚链在膜性肾病肾小球基膜的异常分布
目的 观察Ⅳ型胶原和层粘连蛋白(laminin)亚链在膜性肾病(membranous nephropathy,MN)肾小球基膜(glomerular basement membrane,GBM)中的异常分布.方法 收集52例MN肾组织,按照Ehrenreieh和Churg提出的基于电镜形态特征的分期方法进行分期,同时收集10例微小病变肾组织作为正常GBM的对照.采用间接免疫荧光法检测不同分期MN肾组织GBM正常存在的代表性α5(Ⅳ)链及laminin α5、β2链的分布形态,以及可能异常存在的laminin α2、β1链的表达.结果 在微小病变肾组织中α5(Ⅳ)链、lamininα5和β2链均沿GBM呈连续线状阳性;lamininα2、β1链在GBM中无表达.在Ⅰ期MN肾组织中α5(Ⅳ)链、lamininα5和β2链均呈连续线状表达.Ⅱ期MN肾组织中α5(Ⅳ)链在连续线状表达基础上形成大量钉突;lamininα5、β2链表达不规则增多,节段在连续线状表达基础上形成钉突.在Ⅲ期MN肾组织中α5(Ⅳ)链表达不规则增多,节段双轨状表达;laminin α5、β2链表达不规则增多,节段双轨、链环状表达.laminin α2链在Ⅰ期MN肾组织GBM未见明显阳性表达;在Ⅱ期和Ⅲ期MN肾组织GBM呈颗粒状阳性.laminin β1链在各期MN肾组织GBM均未见明显阳性表达.结论 MN患者GBM增厚不仅源自GBM固有Ⅳ型胶原亚链和laminin同种型的表达增多,还有正常仅表达于肾小球系膜区的lamininα2链的参与.
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肾小球基膜六胺银染色的比较
肾小球肾炎的病变主要表现在肾小球,尤其是肾小球基膜的改变.常规 HE 染色不能清晰地显示基膜,要通过特殊染色(如 PAS 、六胺银浸银法)才能将基膜清晰地显示出来,协助诊断.我们对几种不同处理方法的六胺银染色( periodic acid methenamine silver, PAMS )进行比较和分析.
