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P16基因克隆及其对结肠癌细胞SW480生长的抑制作用
目的 探讨p16基因对结肠癌细胞生长的抑制作用.方法 采用亚克隆技术将p16基因克隆入真核表达载体pEGFP-N3中,Lipofectamine法将p16基因转染入结肠癌细胞株SW480.采用MTT法检测未转染细胞(SW480组)、转染空质粒细胞(SW480-GFP组)和转染p16细胞(SW480-p16组)培养24、48和72 h后细胞的增殖率；Real-Time PCR和Western blotting分别检测3组细胞的p16、CDK4、cyclin D1 mRNA和蛋白的表达情况.结果 p16基因克隆人真核表达载体,并成功转染结肠癌细胞后,在基因和蛋白质水平均有外源性p16基因表达,与SW480组比较,相对表达量均有显著增加(P＜0 01).MTT检测结果显示:培养48 h和72 h后,SW480-p16组的细胞相对增殖率均显著低于SW480组和SW480-GFP组(P＜0.01).Real-Time PCR检测结果显示:SW480-p16组的p16 mRNA相对表达量接近SW480-GFP组的2.38倍,接近SW480细胞的2.59倍,差异具有统计学意义(P＜0.01)；SW480-p16组的cyclin D1 mRNA相对表达量明显低于SW480组和SW480-GFP组细胞(P＜0.05),而CDK4mRNA的相对表达量略低于SW480组和SW480-GFP组,差异无统计学意义(P＞0 05).Western blotting检测结果显示:与SW480-GFP组和SW480组比较,SW480-p16组的P16蛋白表达量明显升高；而CDK4和cyclin D1蛋白表达量明显降低,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 p16基因转染入结肠癌细胞,具有抑制癌细胞生长的功能.
关键词： p16基因 克隆 结肠癌细胞 D型细胞周期蛋白 周期蛋白依赖性蛋白激酶4
