阿司匹林对结肠癌细胞株SW480生长增殖及癌胚抗原含量的影响

目的:观察阿司匹林对结肠癌细胞株Sw480生长增殖及癌胚抗原含量的影响.方法:结肠癌细胞株Sw480常规培养于含有10%小牛血清的RPMI1640培养液中,在37℃,5%CO2中贴壁培养.分别给予阿司匹林0、2.5mmol/L、5.0mmol/L、10.0mmol/L,于加药后2、4、6天微粒子捕捉免疫法测定癌胚抗原(CEA);四甲基谷氮唑蓝实验(MTT)法测定SW480生长抑制率.结果:阿司匹林能减少CEA的生成,对SW480的生长抑制作用呈浓度依赖关系.在观察的药物浓度和时间范围内,共抑制高达78.72%.结论:阿司匹林能抑制结肠癌细胞株SW480生长;CEA可能是监测结肠癌发生、发展、预后的有效指标.

282 吴茱萸碱对鼠结肠癌细胞体外侵袭和实验性肺转移的抑制作用

熊果酸抑制胃癌细胞SGC7901和人结肠癌细胞HT-29增殖

目的:观察熊果酸体外对人胃癌细胞SGC7901及人结肠癌细胞HT-29增殖的影响,并对其机制进行探讨.方法:体外培养人胃癌细胞株SGC7901及人结肠癌细胞株HT-29.用MTT法观察不同浓度UA作用不同时间对细胞增殖的影响;不同浓度UA处理细胞24h后,倒置显微镜观察细胞形态变化;荧光染料Hochest33258染色观察不同浓度UA作用24h细胞凋亡情况.结果:20～40mmol/L UA可抑制SGC7901、HT-29细胞的增殖,并呈浓度和时间依赖性,其作用SGC7901细胞及HT-29细胞24h的药物半数抑制浓度(IC50)分别为(34.28±2.05) mmol/L和(43.23±1.94) mmol/L;20～40mmol/LUA作用24h后,SGC7901细胞及HT-29细胞变圆,出现不同程度的漂浮;同时SGC7901细胞、HT-29细胞发生凋亡,凋亡细胞随药物浓度升高而增多.结论:熊果酸对SGC7901细胞及HT-29细胞具有较强的增殖抑制作用,其机制可能与细胞毒作用、诱导凋亡有关.

CD49f剪接异构体在不同细胞系中的表达

目的 比较CD49f选择性剪接异构体在人不同来源干细胞以及结肠癌细胞系中的表达,并构建特定异构体过表达载体用于功能研究.方法 RT-PCR及real-time PCR检测CD49f选择性剪接异构体在不同细胞中的表达;分子克隆方法构建各异构体的慢病毒过表达载体;流式细胞计量术、Western blot及real-time PCR检测CD49f各异构体的过表达;Transwell方法检测细胞侵袭能力的改变.结果 人胚胎干细胞系H9中表达CD49f异构体B,而上皮类细胞仅表达异构体A;间质细胞中二者均有表达,但异构体A表达多于异构体B;检测的4个结肠癌细胞系中CD49f异构体A和B均有表达,其中HT29和HCT116中以异构体A为主,而HCT8和LoVo中异构体B的表达更为明显.构建的慢病毒表达载体可使HT29中CD49f异构体A和B获得特异性过表达,其中异构体B的过表达使HT29的侵袭能力增加.结论 不同类型细胞中CD49f选择性剪接异构体A和B的表达存在显著差异,二者的生物学功能具有差别.

5-氮杂胞苷对结肠癌细胞CHD5基因表达及细胞增殖活性的影响

目的 研究甲基化转移酶抑制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-氮杂胞苷,AZA)对人肿瘤相关基因CHD5(染色质解旋酶DNA结合蛋白5)在结肠癌细胞中的基因转录的诱导作用以及其对细胞增殖的影响.方法 5 μmol/L 5-氮杂胞苷分别作用于Lovo和SW480细胞,连续作用72 h后,用荧光定量PCR(qPCR)检测两种结肠癌细胞系中CHD5mRNA的表达,重亚硫酸盐测序(BSP)法分析启动子区的甲基化状况,MTT法分析5-氮杂胞苷对Lovo和SW480细胞增殖的影响.结果 5 μmol/L 5-氮杂胞苷处理Lovo和SW480细胞72 h后,Lovo和SW480细胞中CHD5基因的发生了去甲基化,其mRNA重新表达,细胞生长受到抑制.结论 5-氮杂胞苷能够反转CHD5基因的甲基化状态,调控CHD5 mRNA表达,并能有效地抑制结肠癌细胞的增殖.

艰难梭菌A毒素致细胞圆缩化和致死活性的相关性研究

艰难梭菌(Clostridium difficile)是人假膜性结肠炎和抗生素相关性腹泻的主要致病因子.其产生A、B两种与疾病有关蛋白毒素,其中由于A毒素具有肠道毒性而被认为是引起疾病的主要致病因子[1].A毒素的相对分子质量(Mr)很大,在未变性的状态下为(520～540)×103,在变性状态下降解为(220～240)×103左右,没有亚基分离.A毒素有肠道毒性、细胞毒性、小鼠致死活性、血球凝集活性、血管通透亢进等生物学活性.A毒素是一种可溶性蛋白,它通过受体介导的内吞作用进入细胞,诱导许多种哺乳动物组织和细胞发生细胞病变效应[1,2].A毒素对细胞的影响非常复杂,对A毒素的细胞毒性研究一般都是以细胞骨架变化引起的细胞形态变化即细胞圆缩化为敏感指标的,但是有报道认为细胞圆缩化后并不一定死亡[3].而国内虽然对艰难梭菌的分离、毒素精制、诊断方法及试剂方面有所研究,但还未对A毒素的细胞毒性展开工作.为此,我们采用非洲绿猴肾细胞Vero、人甲状腺乳头癌细胞TPC-1、人喉癌细胞HEP2、人肺癌细胞A549、人结肠癌细胞SW1116、人肝癌细胞SMMC7721等6种细胞系,探讨了在A毒素致细胞圆缩化和细胞致死活性之间的关系.

白藜芦醇对γδT细胞杀伤结肠癌SW-1116细胞的影响及机制研究

目的 观察白藜芦醇作用前后γδT细胞对结肠癌SW-1116细胞杀伤活性的变化，并探讨其发生的机制。方法 异戊烯焦磷酸法体外扩增人外周血γδT细胞，不同浓度的白藜芦醇作用于γδT细胞和结肠癌SW-1116细胞，四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测白藜芦醇对γδT细胞及结肠癌细胞的生长的影响；流式细胞术(FCM)检测白藜芦醇作用前后γδT细胞穿孔素、颗粒酶B、CD107a的表达；乳酸脱氢酶( LDH)释放法检测白藜芦醇对γδT细胞杀伤结肠癌SW-1l16细胞活性的影响。Western blot检测药物作用前后γδT细胞细胞外信号调节激酶(ERK1/2)蛋白的活性的变化。结果 白藜芦醇在0.39 ～3.125μmol/L时对γδT细胞的生长具有促进作用，对结肠癌SW-1116细胞作用不明显；经白藜芦醇诱导后γδT细胞的穿孔素、颗粒酶B、CD107a的表达显著高于对照组(P＜0.05);对结肠癌SW-1116细胞的杀伤活性也显著高于未诱导组(P＜0.05)；经浓度为0.1～10 μmol/L白藜芦醇作用的γδT细胞的p-ERK1/2表达较对照组增加(P＜0.05)。结论 白藜芦醇能够促进γδT细胞的增殖，并增强其对结肠癌SW-1116细胞的杀伤能力，其机制可能与上调γδT细胞表面的穿孔素、颗粒酶B、CD107a的表达及活化细胞外信号调节激酶等有关。

冬凌草甲素干预SHH信号通路抑制人结肠癌细胞SW1116增殖的实验探讨

目的 研究冬凌草甲素对结肠癌细胞SW1116增殖的影响及机制.方法 用不同浓度的冬凌草甲素处理SW1116细胞,MTT测定细胞增殖情况,计算其半数抑制浓度.SW1116细胞分为对照组、冬凌草甲素组、Cyclopamine组、联合组,对照组细胞培养液中不添加任何药物,冬凌草甲素组细胞培养液中添加70 μmol/L的冬凌草甲素,Cyclo-pamine组细胞培养液中添加10 μmol/L的SHH信号通路抑制剂Cyclopamine,联合组细胞培养液中添加10 μmol/L的SHH信号通路抑制剂Cyclopamine和70 μmol/L的冬凌草甲素,MTT检测细胞增殖,细胞克隆实验检测克隆形成能力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中音猬因子(SHH)、平滑蛋白(Smo)、锌指转录因子1(Gli-1)、剪切的 Caspase-3(Cleaved Caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)蛋白水平.结果 冬凌草甲素处理后的SW1116细胞增殖能力明显降低,其半数抑制浓度为(69.65 ± 6.32)μmol/L.冬凌草甲素处理后的SW1116细胞增殖、克隆形成能力明显降低,细胞凋亡率明显升高,细胞中SHH、Smo、Gli-1蛋白表达水平降低,Cleaved Caspase-3蛋白表达水平升高, Bcl-2蛋白表达水平降低,与未用冬凌草甲素处理的细胞比较,差异有统计学意义(P ＜0.05).SHH信号通路抑制剂处理也可以抑制SW1116细胞增殖和克隆形成,诱导SW1116细胞凋亡,促进细胞中Cleaved Caspase-3蛋白表达,减少细胞中Bcl-2蛋白表达.联合组的 SW1116细胞增殖能力和克隆形成能力下降更多,细胞凋亡增加更多,细胞中Cleaved Caspase-3蛋白水平更高,Bcl-2蛋白水平更低,与单纯冬凌草甲素处理的SW1116细胞比较,差异有统计学意义(P ＜0.05).结论 冬凌草甲素通过抑制SHH信号通路抑制结肠癌细胞增殖和克隆能力.

超声空化效应对肿瘤细胞迁移运动影响的实验研究

目的 探讨高机械指数的超声造影空化效应对肿瘤细胞迁移运动的影响.方法 体外培养结肠癌细胞株(Lovo细胞).分为对照组、微泡+超声组、单纯超声辐照组和单纯微泡组.使用超声造影剂SonoVue,超声探头频率1.5MHz,机械指数1.7进行超声间歇辐照,采用Millicell-PCF培养小室法,观察超声造影空化效应对肿瘤细胞迁移运动的影响.结果 对照组、单纯辐照组及单纯微泡组之间的迁移能力无明显差异(P>0.05),而微泡+超声组与对照组之间比较,肿瘤细胞的迁移能力明显低于对照组(P<0.01).结论 高机械指数超声造影增强超声的空化效应,对肿瘤细胞的迁移能力有明显抑制作用.

原卟啉Ⅸ在体外和野生型P53蛋白的相互作用及其诱导人结肠癌细胞以P53相关和非相关的方式死亡

背景与目的光动力学疗法(PDT)是对化疗和放疗已产生耐药的肿瘤的一种替代疗法.该方法主要通过激光照射光敏剂产生活性氧,继而杀死肿瘤细胞.有研究表明抑癌蛋白P53能使人类某些肿瘤细胞对PDT治疗更加敏感.但是,目前仍然没有直接的证据来证明这一观点.本研究旨在探讨肿瘤细胞中原卟啉Ⅸ(protoporphyrin Ⅸ,PpⅨ)和野生型P53蛋白的相互作用,及PpⅨ和PpⅨ-PDT诱导人结肠癌细胞发生死亡与P53蛋白的相关性.

细胞凋亡相关基因在二甲双胍抑制结肠癌细胞增殖中的作用

目的：探讨二甲双胍对人结肠癌HT-29细胞增殖、凋亡及裸鼠皮下瘤生长的影响。方法噻唑蓝（MTT）比色法分别检测二甲双胍作用于结肠癌细胞后其细胞活力及生长抑制率；流式细胞仪检测二甲双胍对结肠癌HT-29细胞周期时相、凋亡率的影响；免疫印迹法（Western blot）检测凋亡相关蛋白的表达；将结肠癌HT-29细胞接种于裸鼠，观察不同浓度二甲双胍对裸鼠皮下瘤生长的影响。结果5 mmol/L二甲双胍作用细胞48 h，细胞生长周期阻滞于G0/G1期,细胞凋亡率为（22.46±2.19）%；Western blot检测显示抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xl的表达随着药物浓度的增加而减少，而促凋亡蛋白Bid的表达随着药物浓度增加而增加。高剂量二甲双胍组及联合用药组裸鼠皮下瘤体积显著小于对照组裸鼠瘤的体积，20 d时两组抑瘤率分别为38.4%、67.7%。结论二甲双胍通过线粒体介导的凋亡通路途径来诱导人结肠癌细胞发生凋亡，并抑制结肠癌细胞裸鼠瘤生长。

Parthenolide对结肠癌细胞增殖、迁移、凋亡和 VEGF-C表达的影响

目的：：小白菊内酯( Parthenolide)可通过不同的途径影响肿瘤的进展，但有关其对结肠癌细胞的生物学行为的影响报道较少。本研究的目的就是探讨Parthenolide干预在结肠癌细胞生长、迁移和凋亡中的生物学作用，以及其对结肠癌细胞分泌VEGF- C的影响。应用QRT-PCR、Wstern Blot、免疫组织化学、细胞增殖、迁移及凋亡实验检测Parthenolide干预后结肠癌细胞生物学行为的变化。结果：parthenolide干预后48 h开始抑制细胞活性( P<0.05)；单独应用parthenolide不能影响结肠癌细胞的迁移和凋亡；parthenolide处理后可抑制结肠癌细胞分泌VEGF-C。尾静脉注射Parthenolide可抑制移植瘤生长、淋巴管生成。结论：这些研究表明parthenolide能有效抑制结肠癌细胞及移植瘤的生长，其可能成为潜在的抗癌药物。

洋葱提取物对结肠癌细胞增殖的抑制作用

目的:研究洋葱水提取物和乙醇提取物中黄酮类化合物的含量及其各自对结肠癌细胞株增殖的抑制作用.方法:采用水提取和乙醇提取洋葱后,用紫外可见分光光度仪检测提取物中黄酮类化合物含量.体外培养结肠癌细胞株(LoVo cells、SW480 cells、HT-29 cells、HCT-8 cells),采用不同浓度的黄酮类化合物(0、2.5、5、10、20、40、60、80 mg/L)对其进行干预,WST-8法检测洋葱水提取物和乙醇提取物对结肠癌细胞株增殖的抑制作用.结果:洋葱水提取物中黄酮类化合物含量较乙醇提取物高.WST-8法检测洋葱水提取物和乙醇提取物对结肠癌细胞株的抑制作用具有剂量和时间依赖性,且72 h时水提取物较乙醇提取物对结肠癌细胞株(SW480)增殖抑制(％)更显著(10 mg/L:37.77±5.84 vs 17.36±5.24;20 mg/L:52.35±5.72 vs 24.15±5.54; 40 mg/L:68.17±7.76 vs 32.79±6.02; 60 mg/L:71.08±8.16 vs 47.55±2.45; 80 mg/L:76.00±5.87 vs60.35±6.61,均P＜0.05).结论:洋葱水提取物和乙醇提取物对体外培养的结肠癌细胞株的增殖有明显抑制作用,其作用机制有待进一步研究.

T-STAR基因对结肠癌细胞系HCT-116端粒酶活性的影响

目的:通过正、反义T-STAR(testis-signal transduction and activator ofRNA)基因转染结肠癌HCT-116细胞,观察对细胞端粒酶活性的影响.方法:用脂质体Lipofectamine法将正、反义T-STAR基因转染入HCT-116细胞,用RT-PCR及Westernblot方法检测该细胞T-STAR基因mRNA和蛋白表达变化,并用PCR-ELISA法检测细胞端粒酶活性改变.结果:在T-STAR转染的结肠癌HCT-116细胞中,TSTAR mRNA和蛋白表达显著增加(分别为296%,180%,P＜0.01),端粒酶活性明显升高;而在反义TSTAR转染的细胞中,T-STAR mRNA和蛋白表达显著下降(分别为59%,83.8%,P＜0.01),端粒酶活性明显降低.转染空白载体和未转染细胞中T-STAR表达极端粒酶活性无显著性差异.结论:结肠癌HCT-116细胞T-STAR基因可能参与细胞端粒酶活性的正相调节.

丁酸钠联合穿琥宁对人大肠癌细胞HCT-8增生的影响

目的:探讨丁酸钠、穿琥宁体外联合应用对结肠癌细胞的影响.方法:应用生长曲线、MTT、流式细胞仪、电镜研究丁酸钠、穿琥宁对HCT-8的增生抑制及诱导凋亡作用.结果:丁酸钠对HCT-8细胞有明显抑制作用,48 h后各组抑制率分别为15.7%,20.3%,33.3%(P＜0.01),呈现浓度、时间依赖性.电镜下观察可见成熟分化改变及凋亡细胞,流式细胞仪可检测到亚G1峰,细胞周期分析发现其主要阻滞在G1期.穿琥宁与其联合应用,混合组1在24 h,48h凋亡率为23.5%,48.6%,混合组2在2 4h,48 h凋亡率为30.8%,54.2%(P＜0.01).结论:丁酸钠抑制HCT-8细胞增生,并诱导其成熟分化、凋亡.穿琥宁与其合用使凋亡率增加.

血管抑素基因联合氟尿嘧啶腹腔化疗预防大肠癌术后肝转移的实验

目的:观察血管抑素基因联合氟尿嘧啶腹腔化疗对预防大肠癌术后肝转移的作用.方法:RT-PCR克隆血管抑素基因,建立重组腺病毒载体.建立人结肠癌LoVo肝转移种植的模型,给予血管抑素基因联合氟尿嘧啶腹腔化疗.观察其对大肠癌细胞肝转移的影响.结果:血管抑素基因联合氟尿嘧啶腹腔化疗治疗组肝转移发生率明显低于其他各组(P＜0.05),肝转移瘤数少于其他各组(P＜0.05),荷瘤生存时间长,治疗组肿瘤组织中血管抑素基因表达为阳性,MVD明显低于其他各组.结论:血管抑素的基因治疗与传统的腹腔化疗联合应用,对预防裸鼠人LoVo结肠癌细胞肝转移有一定的作用.

黄连素对HT-29人结肠癌细胞系Ca2+的抑制作用

目的:探讨黄连素对人结肠癌细胞系HT-29的作用及与Ca2+有关的机制,为黄连素作为一种新的结肠癌化学治疗药物进行理论上的准备和提供相关实验结果.方法:0.1 μmol/L,0.3μmol/L,3.0 μmol/L,30.0 μmol/L的黄连素加入到HT-29结肠癌细胞系培养液中.分别在第1 d,第2 d,第3 d测量各有关值.以bapta-AM(33 μmol/L)为细胞内Ca2+螯合剂,verapamil(50 mmol/L)为细胞膜Ca2+通道拮抗剂,分别抑制细胞内Ca2+和细胞膜Ca2+通道,对比观察黄连素对细胞内Ca2+的影响及结肠癌细胞在不同Ca2+浓度条件下各有关值.细胞记数检测细胞的生长和增生,用免疫荧光分光光度法检测细胞内Ca2+浓度.结果:黄连素在浓度大于0.3 μmol/L时则有明显的量效关系抑制结肠癌细胞的生长.黄连素在浓度大于0.3 μmol/L时对细胞内Ca2+的释放有抑制作用.结论:黄连素能够抑制Ca2+的释放可能为黄连素抑制HT-29细胞生长和增生的一个机制.

JNK信号通路在δ氨基酮戊酸-光动力疗法诱导SW480细胞凋亡中的作用机制

目的:探讨JNK信号通路在δ氨基酮戊酸(ALA)-光动力疗法((PDT)诱导SW480细胞凋亡中的作用.方法:将SW480细胞分为空白对照组、激光照射组、ALA组及ALA-PDT组.Western blot 检测各组细胞c-Jun氨基末端激酶(JNK)的表达;用SP600125(JNK抑制剂)预孵育ALAPDT组细胞,Western blot检测各组细胞的多聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)的表达.结果:磷酸化JND在空白对照组、激光照射组及ALA组几乎无表达,ALA-PDT后30-90min细胞表达显著高于空白对照组、激光照射组及ALA组(F=12.314,P＜0.001),其中ALAPDT后60及90min的磷酸化JNK表达显著高于ALA-PDT后30min(F=9.782,P＜0.001),各组细胞总的JNK表达无显著差异.JNK的激活能抑制ALA-PDT诱导sw480细胞凋亡.结论:JNK信号通路的激活抑制ALA-PDT诱导SW480细凋亡;JNK通路可能成为增强ALA-PDT治疗结肠癌的新靶点.

5-FU和抗Fas单抗联合治疗结肠癌的体外实验研究

目的:探讨5-氟尿嘧啶(5-FU)和抗Fas单抗联合治疗结肠癌的效果及其机制.方法:分10 μg/mL 5-FU、抗Fas单抗(CHll)1 μg/mL、5 μg/mL 5-FU+0.5 μg/mL抗Fas单抗及空白对照四组,与SW480细胞共培养.MTT法检测SW480细胞的存活率,TUNEL法检测SW480细胞的凋亡率.免疫细胞化学法检测5-FU和抗Fas单抗处理前后,SW480细胞中Bcl-2的变化.结果:10 μg/mL 5-FU、1 μg/mL抗Fas单抗、5 μg/mL5-FU+0.5μg/mL抗Fas单抗均可抑制细胞生长,且均可诱导细胞凋亡,联合作用组诱导效果明显,其次是5-FU组,抗Fas单抗组诱导效果较差.抗Fas单抗、5-FU均可降低SW480细胞Bcl-2的表达,5-FU与抗Fas单抗对SW480细胞Bcl-2蛋白的表达有协同抑制作用.结论:5-FU和抗Fas单抗对结肠癌细胞具有协同的增生抑制和诱导凋亡作用,其机制可能是协同抑制Bcl-2蛋白的表达.

结肠癌LS174细胞培养上清对树突状细胞诱导CTL杀伤效应的影响

目的:观察结肠癌细胞对人单个核细胞源树突状细胞(DC)诱导的CTL杀伤效应的影响,探讨其在人体的免疫逃避机制.方法:人外周血分离单个核细胞以GM-CSF和IL-4培养DC,用结肠癌LS174细胞的提取物诱导DC,并激活T淋巴细胞抗肿瘤效应,在此不同过程中,体系中加入人结肠癌细胞系LS174的培养上清液.以正常培养体系为对照,通过计算细胞毒杀伤率检测不同条件下DC激活同种异体T淋巴细胞杀伤肿瘤细胞的能力.结果:LS174细胞培养上清液作为条件培养的DC,在DC培养的早期阶段对DC激活过程有明显的影响(在DC培养的第1 d加入肿瘤培养上清组,第3 d加入肿瘤培养上清组vs正常培养的DC组,DC培养第5 d加入肿瘤培养上清组,DC激活T淋巴细胞过程加入肿瘤培养上清组,P＜0.05).结论:肿瘤细胞分泌的某些物质可在DC培养的早期阶段影响肿瘤的免疫,这可能是肿瘤细胞逃避机体免疫监视的机制之一.