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杜仲叶提取物对结肠癌细胞侵袭与迁移的影响
目的:研究杜仲叶提取物以及其活性成分绿原酸对体外结肠癌侵袭与迁移的影响.方法:采用HPLC法检测了杜仲叶提取物中绿原酸的含量;采用了Transwell小室法检测了杜仲叶提取物及绿原酸对结肠癌细胞株HCT116、LOVO侵袭迁移能力的影响.结果:杜仲叶提取物处理过的HCT1 16细胞相对于空白样品侵袭减少49.72％;绿原酸处理过的HCT116细胞相对于空白样品侵袭相对减少66.32％.杜仲叶提取物处理过的LOVO细胞相对于空白样品侵袭相对减少37.16％;绿原酸处理过的LOVO细胞相对于空白样品侵袭相对减少50.11％.迁移实验也遵循同样的规律.结论:杜仲叶提取物具有抑制结肠癌细胞侵袭和迁移的能力,绿原酸的效果更为显著.绿原酸可能是杜仲叶这种生物活性的关键成分.
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杜仲叶活性成分对结肠癌细胞增殖与凋亡的影响
为了揭示杜仲叶中对结肠癌细胞增殖与凋亡的有效成分,首先对杜仲叶提取物进行了成分分析,然后取其中两种主要成分京尼平苷酸与绿原酸分别对结肠癌细胞株HCT116与LOVO细胞进行了增殖与凋亡的影响实验.结果显示:当绿原酸浓度达1.610 6 μg/L时,作用于LOVO细胞的抑制率达94.96％,超过阳性对照药顺铂的抑制效果.而京尼平苷酸抑制效果不显著.绿原酸作用于HCT-116和LOVO细胞的凋亡率分别为24.08％,33.80％,均高于空白对照组的5.83％,13.71％.实验结果证实杜仲叶提取物中绿原酸对结肠癌细胞的增殖与凋亡都有显著影响,是杜仲叶中抑制结肠癌细胞增殖、促进其凋亡的主要成分之一.
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青蒿琥酯对结肠癌细胞增殖及p27和Cyclin D1蛋白表达的影响
目的 探讨青蒿琥酯(ART)对结肠癌细胞增殖作用及其可能机制.方法 人结肠癌细胞(HCT116)常规培养,分对照组、ART低剂量组(10μg/mL)和ART高剂量组(20μg/mL),绘制生长曲线检测相关蛋白.siPRMT6转染细胞,Real time PCR和Western blot检测ART对结肠癌细胞增殖及相关蛋白表达的影响.结果 HCT116细胞经10和20μg/ml ART处理后72 h,细胞增殖显著降低,p27和Cyclin D1表达水平显著降低,p21蛋白显著升高.PRMT6基因沉默后,ART不能发挥作用,逆转p27、Cyclin D1和p21 mRNA和蛋白表达变化.结论 ART能显著抑制结肠癌细胞增殖,可能与p27、Cyclin D1和PRMT6蛋白有关.
关键词： F青蒿琥酯 结肠癌细胞 增殖 蛋白质精氨酸甲基转移酶6 -
体外培养APA微囊化肿瘤坏死因子α/293细胞对结肠癌细胞增殖的影响
背景:积极探索结肠癌相关基因及抑癌基因已成为新的研究热点,人肿瘤坏死因子α是一个重要的促炎因子和免疫调节因子,对肿瘤的免疫治疗具有一定的疗效.目的:观察体外培养海藻酸钠-聚赖氨酸-海藻酸钠(alginate-polylysine-alginate,APA)微囊化肿瘤坏死因子α/293细胞对结肠癌细胞增殖的影响.方法:采用前期建立的制备方法,用APA微囊分别包裹人肿瘤坏死因子α/293细胞,APA微囊化0/293细胞.取对数生长期结肠癌(Lovo)细胞,配制成所需浓度的细胞悬液,接种24孔板培养,分别加入低、中、高剂量稳定转染的APA微囊化肿瘤坏死因子α/293,即分为5个实验组,APA微囊化肿瘤坏死因子α/293细胞低剂量组、中剂量组、高剂量组、阴性组为APA微囊化0/293细胞组,阳性组加入肿瘤坏死因子α,MTT法检测490 nm吸光度;通过对人肿瘤细胞增殖抑制实验,观察对结肠癌细胞(Lovo)增殖的抑制作用.结果与结论:体外培养中,加入APA微囊化0/293细胞组对结肠癌细胞增殖无抑制作用;而APA微囊化肿瘤坏死因子α/293细胞中、高剂量组和阳性组,在24,48,72 h的A值低于APA微囊化0/293细胞组(P < 0.05),提示APA微囊化人肿瘤坏死因子α/293细胞所分泌肿瘤坏死因子α对结肠癌细胞有增殖抑制效应,均呈现出良好的数量依赖关系.
关键词： 人肿瘤坏死因子α 微囊 结肠癌细胞 人胚胎肾细胞HEK-293 增殖 -
海藻酸钠/鬼臼毒素凝胶载药体系制备、释放及对结肠癌的抑制效果
背景:鬼臼毒素具有抑制癌细胞增殖、抗病毒和抗病虫害的功能,但其单独应用有较大不良反应且生物利用度低.目的:制备海藻酸钠/鬼臼毒素凝胶珠,以期望实现鬼臼毒素的控释或靶向给药,提高疗效,降低其生物毒性和不良反应.方法:采用外部离子凝胶法制备海藻酸钠/鬼臼毒素凝胶珠,检测鬼臼毒素质量浓度分别为25,50,75 g/L时的凝胶珠载药量,以及凝胶珠在不同pH值环境中(pH=2.1,4.6,7.4)的溶胀率及释药行为.分别以含5,10,20,40 mg/L海藻酸钠/鬼臼毒素凝胶珠(或鬼臼毒素或海藻酸钠)的细胞培养基培养肠癌细胞SW480与肠上皮细胞NCM460,48 h后,检测肠上皮细胞NCM460的存活率及肠癌SW480细胞的抑制率.结果与结论:①当鬼臼毒素质量浓度分别为25,50,75 g/L时,凝胶珠的载药率分别为8.97%,17.02%和19.16%;②当鬼臼毒素质量浓度分别为25,50,75 g/L时,凝胶珠在pH=2.1,4.6的环境中几乎不溶胀;在pH=7.4的环境中溶胀,且随着鬼臼毒素质量浓度的增加,凝胶珠溶胀率增加;③在pH=7.4的环境中,24 h内有(69.5±9.1)%的鬼臼毒素缓慢地从凝胶珠中释放出来;在pH=2.1,4.6的环境中,24 h内只有(2.0±0.2)%和(2.1±0.6)%的鬼臼毒素从凝胶珠中释放出来;④随着药物质量浓度增加,各组NCM460细胞存活率逐步下降,海藻酸钠无细胞毒性,鬼臼毒素有明显的细胞毒性,凝胶珠可降低鬼臼毒素的细胞毒性;⑤随着药物质量浓度的增加,各组SW480细胞抑制率逐渐提高,凝胶珠的抑制作用强于海藻酸钠与鬼臼毒素;⑥结果表明,海藻酸钠/鬼臼毒素凝胶珠是一种有研究前景的pH敏感缓释型结肠癌载药体系.
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人侵袭性结肠癌细胞内质网的超微结构
目的：观察在细胞中占中心地位的内质网在人侵袭性结肠癌细胞中的超微结构特点。方法：收集外科手术切除的结肠癌标本，应用透射电镜技术观察高分化和低分化人侵袭性结肠癌细胞内质网结构。结果：高分化癌细胞呈柱状，排列较整齐。细胞质中的内质网呈多种形状，并常出现不规则扩张。细胞壁底侧的舌状伪足中可见内质网呈囊泡样；分化癌细胞排列松散，有的几乎与其他细胞脱离。细胞中的内质网减少，有的内质网与质膜融合，但有向外分泌内含物的趋势。结论：观察到的不同分化程度的人侵袭性结肠癌细胞内质网结构特点将可能成为诊断结肠癌的形态学依据。
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阿托伐他汀对人 NK细胞杀伤结肠癌细胞的影响及其机制研究
目的：：探讨阿托伐他汀对人NK细胞杀伤结肠癌细胞的影响及其机制。方法：不同浓度的阿托伐他汀作用于3株结肠癌细胞(HCT-116、SW-480、Caco-2),CCK-8法测定阿托伐他汀对结肠癌细胞生长抑制率的影响。 SCGM培养基体外扩增人NK细胞,自动生化分析仪测定NK细胞对3株结肠癌细胞的杀伤活性；流式细胞仪检测结肠癌细胞MICA/B的表达率。结果：(1)NK细胞的培养：培养前CD3-CD56+的NK细胞占外周血单个核细胞的比例为4.5%,培养10 d时NK细胞的比例增至93.1%。(2)阿托伐他汀对3株结肠癌细胞生长抑制率的影响：阿托伐他汀作用48 h后,在浓度5~40μmol/L的4个实验组中,HCT-116细胞的生长抑制率较对照组升高(P<0.05)。作用96 h后,在1.25~40μmol/L的所有浓度组(6个)中, HCT-116细胞的生长抑制率均显著高于对照组(P<0.05)。另外, HCT-116细胞的生长抑制率随着阿托伐他汀浓度的升高而逐渐上升,相关分析显示,阿托伐他汀的浓度与HCT-116细胞的生长抑制率呈正相关(r[48 h]=0.13,r[96 h]=0.22,P<0.05)。(3)NK细胞经阿托伐他汀作用96 h后,除浓度为20μmol/L和40μmol/L时抑制率高于对照组,其他各组对NK细胞生长无明显影响。(4)阿托伐他汀对NK细胞杀伤结肠癌细胞活性的影响：NK细胞对HCT-116细胞的杀伤活性在阿托伐他汀浓度2.5~10μmol/L组均显著高于对照组,对SW-480的杀伤活性在5~20μmol/L组较对照组明显升高,对Caco-2的杀伤活性在2.5~20μmol/L组显著高于对照组(P<0.05),其中同一浓度时对HCT-116细胞杀伤作用强。(5)阿托伐他汀对结肠癌细胞MICA/B表达的影响：在阿托伐他汀浓度2.5μmol/L及5μmol/L组,HCT-116细胞MICA/B的表达率与对照组比较显著升高( P<0.05),在10μmol/L 及20μmol/L 组, SW-480细胞 MICA/B 表达率显著高于对照组( P<0.05),在2.5~40μmol/L组,Caco-2细胞MICA/B的表达率均较对照组显著升高(P<0.05)。结论：(1)阿托伐他汀能够呈剂量依赖性抑制结肠癌细胞HCT-116、SW-480及Caco-2的生长；(2)阿托伐他汀能够增强NK细胞对结肠癌细胞的杀伤活性,可能与阿托伐他汀上调结肠癌细胞MICA/B的表达有关；(3)阿托伐他汀可以上调3株结肠癌细胞MICA/B的表达率,提高结肠癌细胞的免疫原性。
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抗原负载的DC及CIK对结肠癌细胞SW1116杀伤活性的比较研究
目的 探讨树突状细胞(dendritic cells,DCs)以及CIK(cytokine induced cells)细胞对结肠癌细胞SW1116的体外杀伤作用,为结肠癌的治疗提供新的治疗手段.方法 用IL-4、GM-CSF、TNFα等细胞因子诱导培养DC细胞,并用抗原进行负载;用CD3Ab、IFNγ、IL -2、IL-1α等诱导培养CIK细胞,分别用抗原负载的DC、CIK细胞对人结肠癌细胞SW1116进行体外杀伤活性实验,比较两者对SW1116的杀伤效果.结果 抗原负载的DC和CIK对SW1116均有较强的杀伤效果,分别达到64.10%和67.70%.结论 抗原负载的DC及CIK对人结肠癌细胞SW1116在体外具有较强的杀伤作用.
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靶向RhoA基因的shRNA对结肠癌细胞黏附和迁移的影响
目的 研究RhoA小干扰RNA对人结直肠癌细胞LoVo生物学特性的影响.方法 构建针对RhoA mRNA的干扰质粒pGPU6/GFP/Neo-shRNA-RhoA并将其转染LoVo细胞.实时定量RT-PCR和Western印迹检测RhoA mRNA和蛋白的表达量;肿瘤细胞黏附实验检测细胞黏附能力的改变及Matrigel侵袭实验检测细胞侵袭力的改变.结果 LoVo细胞转染pshRNA-RhoA后,RhoA mRNA表达量明显下降,蛋白表达水平亦显著降低.细胞黏附实验和Matrigel侵袭实验结果显示,RhoA重组质粒转染组黏附率明显下降,细胞侵袭力明显下降.结论 构建的靶向RhoA的pshRNA-RhoA真核表达载体可以有效、特异地阻断结直肠癌LoVo细胞中RhoA基因的表达,阻断RhoA基因的表达能显著降低其侵袭、黏附能力.
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H2 S对外源性LY294002预处理人结肠癌细胞凋亡的影响
目的 研究H2 S对体外培养人结肠癌细胞凋亡的影响及其机制.方法 体外培养人结肠癌细胞,随机分为正常对照组、NaHS(100μmol/L)组、LY294002(2μg/ml)组、NaHS(100μmol/L)+LY294002(2μg/ml)组,采用流式细胞术检测各组干预48 h后对人结肠癌细胞凋亡的影响,Western印迹检测各组干预48 h后对人结肠癌细胞中磷酸化Akt、非磷酸化GSK-3β蛋白表达的影响.结果 与正常对照组比较,NaHS组人结肠癌细胞凋亡显著降低,p-Akt蛋白表达显著增加,而GSK-3β蛋白表达显著降低(均P<0.01).LY294002组人结肠癌细胞凋亡显著增加,p-Akt蛋白表达显著降低,而GSK-3β蛋白表达均显著增加(均P<0.01).而与NaHS组比较,NaHS+LY294002组人结肠癌细胞凋亡显著增加,p-Akt蛋白表达显著降低,而GSK-3β蛋白表达显著增加(均P<0.01).结论 PI3K/Akt/GSK-3β信号通路可能介导参与了H2 S对人结肠癌细胞凋亡的抑制作用.
关键词： 结肠癌细胞 硫化氢 细胞凋亡 PI3K/Akt/GSK-3β信号通路 -
结直肠癌缺失基因功能区诱导结肠癌细胞凋亡
目的 检测结直肠癌缺失(DCC)基因功能区转染表达后对结肠癌细胞SW1ll6凋亡的诱导作用.方法 通过脂质体法将含有DCC基因胞内区功能域(3727-3792 bp)的重组表达载体pIRES2-EGFP-DCC转染到结肠癌细胞SWI116,MTT比色法检测细胞增殖情况,TUNEL、AO/EB染色法检测细胞凋亡情况.结果 转染SWl116细胞36 h后,MTT比色法检测结果表明实验组细胞数目低于对照组,并且具有显著性差异；AO/EB染色及TUNEL法检测结果表明实验组有大量凋亡细胞,对照组未见凋亡细胞.结论 DCC基因的胞内功能域(3727-3792 bp)具有诱导结肠癌细胞凋亡的作用.
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生长抑素联合阿霉素体外抑制结肠癌细胞的实验研究
目的:研究生长抑素类似物奥曲肽(OCT)对人结肠癌细胞株LOVO的体外抑制作用,并探讨奥曲肽与阿霉素是否具有协同作用.方法:不同浓度的OCT和阿霉素作用于体外培养的人结肠癌细胞LOVO;采用MTT比色分析法测定奥曲肽和阿霉素对细胞生长的调控.结果:OCT和阿霉素都抑制结肠癌细胞的生长,随着药物浓度的增高,抑制率也逐渐增高;在联合用药各组中,联合应用阿霉素和1.0μg/mlOCT组抑制率显著高于单纯用药组.结论:OCT可以抑制体外培养的人结肠癌细胞株LOVO的生长;OCT与阿霉素联用的抑制率明显高于单用阿霉素及OCT组.
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脂多糖对人结肠癌细胞产生β-防御素3的影响
目的 分析脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对人结肠癌RKO细胞产生的β-防御素3(mouseβ-defensins-3,mBD-3)的影响.方法 将不同浓度(0、10、20和40 ng/ml)的LPS作用于RKO细胞0、24、48和72 h,MTT法检测LPS对RKO细胞的佳抑制浓度;定量RT-PCR及Western blot法检测LPS作用的RKO细胞中mBD-3的表达情况.结果 LPS对RKO细胞的抑制作用在浓度20 ng/ ml、培养48 h时佳.10、20和40 ng/ ml LPS作用的RKO细胞,mBD-3 mRNA及蛋白表达水平均明显高于0 ng/ ml LPS组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 LPS可以促进mBD-3的表达,为进一步研究mBD-3的产生机制奠定了基础.
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大肠埃希菌对人结肠癌细胞RKO产生β防御素-3的影响
β防御素是天然抗菌肽家族的重要成员,同时也是机体先天性防御屏障的重要组成部分,对细菌、真菌和病毒入侵机体具有重要的防御作用[1.2].β防御素-3通常受外界环境的刺激而产生[3],在人体上皮细胞和黏膜组织中广泛表达,具有广谱的抗微生物活性,能促进伤口愈合,发挥免疫调节及抗肿瘤等多种作用.β防御素-3在呼吸系统疾病、消化系统疾病及囊性纤维化、肿瘤等疾病中发挥重要作用,因此,本实验通过大肠埃希菌来刺激人结肠癌PKO细胞,检测β防御素-3在大肠埃希菌中的表达,现将结果报道如下.
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阿苯达唑对人结肠癌SW480细胞增殖、凋亡及Bcl-2表达的影响
目的 观察阿苯达唑(Albendazole,ABZ)对人结肠癌SW480细胞增殖、凋亡及其对Bcl-2表达的影响,并探讨其作用机制.方法 用不同终浓度的ABZ(0.5、1.0、2.0及4.0mg/ml)处理SW480细胞24、48、72 h,设对照组(ABZ浓度为0 mg/ml),CCK-8法检测ABZ对SW480细胞增殖活力的影响,并计算增殖抑制率及IC50.用不同终浓度的ABZ(1.0、2.0 mg/ml)处理SW480细胞,设对照组(ABZ浓度为0 mg/ml),流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR及Western blot检测Bcl-2 mRNA及蛋白的表达.结果 与对照组比较,0.5、1.0、2.0及4.0 mg/ml ABZ处理组A值均明显降低(P＜0.05),随着作用浓度的增加及作用时间的延长,抑制作用逐渐增强,且呈时间-剂量依赖性,2.0 mg/ml ABZ处理组24、48、72 h的IC50值分别为3.18、1.96和1.03 mg/ml;与对照组比较,1.0、2.0mg/mlABZ处理组细胞凋亡率均明显增加(P＜0.05),Bcl-2 mRNA及蛋白的表达均明显降低(P＜0.05).结论 ABZ能抑制结肠癌SW480细胞的增殖,并显著促进细胞凋亡,其作用机制可能与下调Bcl-2表达有关.
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红蓝果蔬健康防癌
据美国《华盛顿邮报》报道,美国俄亥俄州大学近期研究证明,一些红蓝色水果和蔬菜不仅有益健康,还具有较好的防癌作用.研究人员从一些红色、蓝色或紫色水果蔬菜中,提取出一种天然色素--花青素,他们把花青素装入有结肠癌细胞的长颈瓶中,发现花青素能够抑制癌细胞的生长,并杀死了其中20%的癌细胞.
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抑癌基因DLC-1在结肠癌细胞sw480中表达的研究
目的:初步探讨DLC-1基因在结肠癌细胞sw480中的表达改变及其可能机制;方法:采用RT-PCR和Western blot分析结肠癌细胞CaCo2、sw480的DLC-1表达情况;应用去甲基化药物5-氮杂胞苷处理DLC-1基因阴性表达的细胞株,观察用药前后该细胞DLC-1基因的表达水平、细胞周期、细胞增殖力和侵袭力的影响.结果:CaCo2细胞高表达DLC-1 mRNA,而sw480则呈现表达缺失.经去甲基化药物5-氮杂胞苷处理sw480后,DLC-1 mRNA恢复表达,比较用药前后sw480细胞增殖力下降、细胞周期被阻滞在G2期、细胞侵袭力减弱.结论:DLC-1基因可影响结肠癌细胞sw480的增殖能力和侵袭力,并使结肠癌细胞sw480细胞周期阻滞于G2期,DNA甲基化可能是导致DLC-1在sw480细胞中的失活的一个重要原因.
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敲低HSP60对结肠癌SW480细胞增殖能力的影响及其机制探究
目的:研究热休克蛋白60 (HSP60)敲低对结肠癌SW480细胞增殖的影响,并进一步探究其作用机制.方法:通过含HSP60shRNA载体的慢病毒感染加上流式细胞仪无菌分选的方法构建结肠SW480HSP60基因稳定RNA干扰(RNAi)单克隆细胞系,利用Western blot和q-PCR验证结肠癌细胞中HSP60的敲低效率;使用CCK-8试剂检测结肠癌细胞增殖能力,并用流式细胞仪检测其HSP60敲低对细胞周期的影响.结果:Western blot和q-PCR结果验证了HSP60在结肠癌细胞中的敲低效率,与对照组细胞相比,实验组细胞HSP60的mRNA水平和蛋白水平均降低了60％以上.CCK-8实验结果表明,敲低HSP60后SW480细胞的增殖能力下降了约70％;流式细胞周期实验显示敲低HSP60后SW480细胞中G0/G1期、S期、G2/M期的分布比例变化不大.结论:敲低HSP60能够显著抑制SW480细胞的增殖能力,而SW480细胞周期并没有发生明显变化,推测HSP60的敲低引起的线粒体损伤导致细胞生长速度变慢.
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miR27a对结肠癌细胞增殖和侵袭能力的影响
目的:检测miR196a、miR146a、miR27a和miR200a在结肠癌患者中的表达情况,研究差异miRNA对结肠癌细胞功能的影响.方法:用PCR检测miR196a、miR146a、miR27a和miR200a在结肠癌患者癌组织中的表达情况;用转染技术高表达和低表达miR27a后,检测结肠癌细胞的增殖能力和侵袭能力.结果:结肠癌组miR27a的表达水平与正常组和大肠炎组相比显著增加(P＜0.05);miR27a mimics转染组结肠癌细胞的增殖速度和侵袭能力显著增高(P＜0.05),且miR27a inhibitors转染组结肠癌细胞的增殖速度和侵袭能力明显降低,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:结肠癌患者miR27a的表达水平显著增高,且miR27a能增强结肠癌细胞的增殖能力和侵袭能力.
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高压氧联合化疗药物对结肠腺癌细胞CT26小鼠移植瘤生长的影响
目的:探讨高压氧联合化疗药物对结肠腺癌细胞CT26小鼠移植瘤生长的影响.方法:建立小鼠结肠腺癌移植瘤模型,观察0.2Mpa HBO及联合化疗药物5-FU或紫杉醇对荷瘤小鼠肿瘤生长的影响,计算肿瘤抑制率;用流式细胞仪观察0.2Mpa HBO对CT26细胞周期的影响.结果:动物实验结果显示:HBO组小鼠肿瘤体积抑制率为:22.39%,肿瘤质量抑制率为:25.77%;5-FU组分别为:42.38%,43.61%;5-FU+HBO组分别为:72.10%,71.47%;紫杉醇组分别为:26.31%,23.04%;紫杉醇+HBO分别为:33.24%,30.96%.5-FU+HBO组与5-FU组及HBO组相比较有显著性差异(p＜0.01);紫杉醇+HBO组与紫杉醇组及HBO组相比差异不明显.流式细胞仪检测结果显示:0.2 Mpa HBO诱导CT26细胞在S期积蓄(G0/G1期(55.89%)、S期(40.79%)、G2/M期(3.32%)).结论:0.2 Mpa HBO可抑制了CT26结肠腺癌小鼠移植瘤的生长,并能增强细胞周期特异性化疗药物的敏感性.
