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加热诱导结肠癌细胞Lovo凋亡的研究
目的:观察加热对人结肠癌细胞株Lovo的凋亡作用. 方法:用Hochest 33258荧光染色、凝胶电泳和流式细胞术观察不同时间-温度作用下Lovo细胞的变化. 结果:不同温度-时间处理的细胞均发生凋亡,出现明显的形态学改变及凋亡特有的亚二倍体峰和DNA梯度.其中43℃处理3、4 h和44℃处理1、2 h 时细胞凋亡明显,细胞周期也发生变化. 结论:加热可诱导人结肠癌细胞株Lovo发生凋亡,并具有一定的周期特异性.
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白藜芦醇阻断转化生长因子-/Smad通路抑制人结肠癌细胞系SW480侵袭转移实验研究
目的 探讨中药白藜芦醇对SW480细胞活力及侵袭转移力的影响.方法 将人结肠癌细胞系SW480用白藜芦醇处理48h,MTT法检测白藜芦醇对SW480细胞活力的影响;流式细胞术检测白藜芦醇对SW480细胞周期的影响;Transwell穿膜试验检测白藜芦醇对SW480细胞侵袭转移能力的影响;western blot实验检测肿瘤细胞转移相关蛋白E-上皮型细胞钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达水平;Western blot实验检测上游磷酸化Smad蛋白(p-Smad)的表达水平.结果 对照组及5、10、15、20、40μmol/L白藜芦醇组对SW480细胞活力的抑制率分别为0、(5.4±1.0)％、(22.5±3.3)％、(36.4±4.4)％、(62.2±6.1)％、(85.1±7.5)％,各组间细胞活力抑制率差异有统计学意义(P＜0.05).对照组及5、10、15、20、40μ mol/L白藜芦醇组对SW480细胞周期G2/M阻滞率分别为(2.3±0.3)％、(4.3±0.5)％、(8.9±1.2)％、(15.6±2.3)％、(22.7±2.7)％、(30.4±2.9)％,各组间G2/M阻滞率差异有统计学意义(P＜0.05).对照组及转化生长因子-β(TGF-β)组、TGF-β+5μmol/L白藜芦醇组、TGF-β+ 10μmol/L白藜芦醇组、TGF-β+ 15 μmol/L白藜芦醇组、TGF-β+20μmol/L白藜芦醇组、TGF-β+40μmol/L白藜芦醇组穿过Transwell膜的SW480细胞数分别为(204.2±19.4)个、(453.5 ±41.6)个、(411.2±45.2)个、(315.7±32.7)个、(246.3 ±27.2)个、(197.8±23.5)个、(97.4± 11.2)个,各组间细胞数差异有统计学意义(＜0.05).白藜芦醇体外处理置于TGF-β培养体系中的SW480细胞后,E-cadherin表达水平显著上升,Vimentin及MMP-9表达水平显著下降(P＜0.05).白藜芦醇显著降低TGF-β诱导的SW480细胞Smad蛋白磷酸化水平.结论 白藜芦醇有良好的体外抗结肠癌的生物活性,更重要的是它能通过阻断TGF-β/Smad通路抑制结肠癌细胞的侵袭转移.
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肿瘤转移新见解
美国马里兰州巴尔的摩市的约翰@霍金斯医学院的KennethKinzier、BertVogelstein等研究发现一种名为PRL3的酪氨酸磷酸酶在伴肝转移的结肠癌细胞中有高表达,而在无转移的结肠癌细胞和正常结肠上皮细胞则表达较低.至少一些病例表明这是由于基因的改变,即PRL3基因的扩增.这项发现显示,这个控制细胞活动的酶表达增加,可促进结肠癌转移至肝脏.研究小组通过应用"基因连续分析"(SAGE)技术来探讨结肠癌转移的分子生物学机制,将结肠癌组织中的肿瘤细胞从其他类型细胞中分离出来,再进行基因表达谱的比较.结果显示,在伴转移的结肠癌细胞中有144个基因表达增加,79个基因表达减少.由于在所有伴转移的结肠癌细胞中,PRL3基因的表达一致增加,并且其结构显示属于酪氨酸磷酸酶类,因而研究者将研究的重点聚焦于PRL3.酪氨酸磷酸酶类能脱去酪氨酸的磷酸基,参与细胞活动的调节.对于PRL3如何促进结肠癌转移,目前尚不得知.研究者试图查明PRL3是在肿瘤转移的哪一阶段中发挥作用,以及PRL3与其他肿瘤的转移是否相关.顾琳慧摘译自Science2001,294:231-232
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成纤维细胞与结肠癌细胞相互作用对IGFBP7表达的影响
目的:试图证实结肠癌细胞与成纤维细胞相互作用能影响胰岛素样生长因子结合蛋白7(IGFBP7)的表达,初步探讨肿瘤-间质相互作用对结肠癌生长的作用.方法:结肠癌细胞系SW480与成纤维细胞HELF共培养于RPMI 1640培养液中,分别于0、48、72和96 h收集细胞,采用RT-PCR和免疫细胞化学法检测两种细胞中IGFBP7的表达.结果:两种细胞经共培养48 h后,SW480细胞IGFBP7 mRNA和蛋白表达均上调,HELF细胞原不表达IGFBP7,经与肿瘤细胞共培养48 h后,开始表达IGFBP7并与共培养时间成正相关.结论:结肠癌细胞与成纤维细胞相互作用促进二者表达IGFBP7,提示肿瘤-间质相互作用可能对结肠癌演进具有抑制作用.
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青蒿琥酯诱导人结肠癌细胞凋亡与Wnt/β-catenin信号通路的关系研究
目的：研究青蒿琥酯( ART)对人结肠癌Lovo细胞增殖的影响和可能的分子机制。方法采用噻唑蓝实验( MTT)检测ART对Lovo细胞的增殖抑制作用,用流式细胞术和电镜检测ART对细胞凋亡的影响,荧光素酶报告质粒检测ART对Wnt/β-catenin通路中TCF4/LEF转录活性的影响, Western blot 检测 ART 对细胞内β-catenin、GSK-3β、c-Myc以及凋亡相关蛋白caspase-3表达的影响。结果与对照组相比,ART能抑制Lovo细胞增殖,72 h、320μmol · L-1 ART的细胞抑制率高达(78．99±1．95)%(F=898．301, P=0．000)。 ART能诱导细胞凋亡,24 h、160μmol·L-1 ART的细胞早期凋亡率达到(19．00±0．05)%,同时电镜观察到细胞凋亡的形态学表现。 ART能降低TCF4/LEF报告质粒的荧光素酶活性,24 h、160μmol · L-1 ART可使TCF4/LEF报告质粒的荧光素酶活性降至(0．36±0．30)%(F =470．954,P<0．01)；ART处理48 h后,GSK-3β和caspase-3呈浓度依赖性升高(P<0．01),而β-catenin和c-Myc蛋白水平呈药物浓度依赖性降低( P<0．01)。结论青蒿琥酯能明显抑制结肠癌Lovo细胞增殖,并促进其凋亡,可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路活化有关。
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粉防己甲素抑制人结肠癌细胞增殖与Wnt/β-catenin信号的关系研究
目的 研究粉防己甲素(tetrandrine,Tet)对人结肠癌细胞增殖的抑制作用及可能的机制.方法 采用结晶紫染色和流式细胞分析检测Tet对HCT116细胞增殖的抑制作用;利用流式细胞术分析和Annexin-V EGFP染色检测Tet对HCT116细胞凋亡的影响; 利用萤光素酶报告质粒法检测Tet对Wnt/β-catenin信号转导的影响;采用Western blot检测Tet对HCT116细胞内β-catenin蛋白水平的影响.结果 与对照组相比,Tet能抑制HCT116细胞增殖,在5 μmol·L-1时已明显抑制细胞增殖(P<0.05); 流式分析和Annexin-V EGFP免疫荧光染色检测结果 均显示,Tet能明显诱导HCT116细胞凋亡; 与对照组相比,Tet处理组LEF/ TCF4和Myc/Max报告质粒萤光素酶活性降低,并且Tet处理组细胞内β-catenin 蛋白水平也明显下降.结论 Tet能抑制HCT116细胞增殖并促进其凋亡,其机制可能与Tet通过降低细胞内β-catenin蛋白水平,抑制Wnt/β-catenin信号转导有关.
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瘦素对5-氟尿嘧啶损伤结肠癌细胞的影响
目的探讨不同浓度的瘦素对5-氟尿嘧啶(5-FU)损伤结肠癌细胞的影响. 方法同时用5-FU及不同浓度的瘦素进行体外干预结肠癌HT-29细胞株.MTT法检测5-FU 50%细胞生长抑制率(IC50)的变化.流式细胞仪、原位末端转移酶标记法(TUNEL)进行周期及凋亡分析.以RT-PCR方法检测caspase-9,caspase-3 mRNA的表达.结果瘦素抑制5-FU对HT-29的杀伤作用.抑制5-FU诱导的细胞周期阻滞及细胞凋亡.RT-PCR表明加入瘦素后caspase-9,caspase-3 mRNA的表达均下降,且呈剂量依赖性. 结论瘦素通过下调caspase-9,caspase-3 的表达促进结肠癌细胞产生凋亡抵抗,抑制5-FU的损伤作用.
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半枝莲不同极性部位提取物体外抗结肠癌活性研究
目的 通过观察半枝莲的石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇部位提取物对人结肠癌SW620和HT-29细胞的影响,探讨半枝莲抗结肠癌的有效部位. 方法 半枝莲的4个极性部位提取物分别对人结肠癌SW620和HT-29细胞进行药物干预24 h,用MTT法测定4个极性部位对细胞活力的影响,并在倒置显微镜下观察细胞的形态. 结果 半枝莲氯仿、正丁醇、乙酸乙酯及石油醚提取物干预后,氯仿提取物使结肠癌细胞SW620、HT-29的细胞密度明显减少,细胞变小,且对两株细胞的细胞活力也有显著的抑制作用,并呈现明显的剂量依赖性；其它各极性部位的作用不明显,作用由强到弱依次为氯仿提取物＞正丁醇提取物＞乙酸乙酯提取物＞石油醚提取物；其中氯仿提取物抗SW620和HT-29的IC50分别为65 μg/mL和130 μg/mL. 结论 半枝莲氯仿提取物是半枝莲治疗人结肠癌细胞的主要有效部位.
关键词： 半枝莲不同极性部位提取物 结肠癌细胞 MTT法 细胞形态 -
过表达STAT1与CD74CD44促进结肠癌细胞粘附和迁移的相关性
目的 探讨信号转导和转录激活子1(STAT1)与CD74/CD44在结肠癌中异常表达与肿瘤转移的相关性.方法 培养结肠癌细胞株Ls-174-T,待其生长至对数生长期,传至第3代收集肿瘤细胞,各细胞分为3份.1份行RT-PCR、Western blotting方法检测STAT1与CD74/CD44表达情况;1份检测定量粘附细胞数;1份以划痕实验检测细胞迁移能力.统计分析比较STAT1与CD74/CD44在结肠癌细胞中的异常表达情况及与肿瘤迁移和粘附能力的相关性.结果 RT-PCR、Western blotting结肠癌组织中STAT1与CD74/CD44的蛋白及mRNA表达显著高于正常结肠组织,两组相比具有统计学差异(P＜0.05).MTT法检测结果显示,不同作用时间(0、6、12、24、48 h)不同剂量STAT1与CD74/CD44过表达质粒(0.000、0.001、0.010、0.060、0.100 mg/ml)干预后,结肠癌细胞体外粘附能力明显加强,与对照组(0.000 mg/ml各组)相比,差异有统计学意义;Transwell结果显示,不同作用时间(0、6、12、24、48 h)不同剂量STAT1与CD74/CD44过表达质粒(0.000、0.001、0.010、0.060、0.100 mg/ml)干预后,结肠癌细胞体外迁移能力随着时间及剂量的增加而明显加强,与对照组(0.000mg/ml各组)相比,差异有统计学意义.结论 STAT1与CD74/CD44在结肠癌细胞中高表达,从而调节结肠癌细胞粘附和迁移能力的作用,表明STAT1与CD74/CD44在结肠癌发生进展中可能与肿瘤的侵袭和转移密切相关.
关键词： 转录激活子1(STAT1) CD74/CD44 结肠癌细胞 细胞粘附 迁移 -
NES1基因在结肠癌细胞中表达及意义
目的：探讨NES1基因在结肠癌细胞中表达及意义。方法用RT-PCR方法检测NES1mRNA在正常结肠细胞、结肠癌细胞株HT29、HCT116表达情况。结果 NES1在结肠癌细胞株中表达较正常结肠黏膜细胞明显增高。结论 NES1基因在结肠癌的发生发展中起重要作用，这为选用NES1作为结肠癌治疗靶点提供了实验依据及理论基础。
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藜蒿提取液对结肠癌细胞生长抑制的实验研究
目的 观察藜蒿提取液对结肠癌细胞的生长抑制作用.方法 采用CCK-8法研究了不同浓度藜蒿提取液对鼠结肠癌细胞株CMT-93的生长抑制作用.结果 藜蒿提取液可抑制鼠结肠癌细胞的生长,在一定范围内(125～1000μg/ml)呈剂量依赖关系.结论 藜蒿提取液对鼠结肠癌细胞的生长有抑制,并且呈剂量依赖关系.
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唑来膦酸对结肠癌细胞株CT26增殖、凋亡的影响及其机制探讨
目的 观察唑来膦酸(ZOL)对结肠癌细胞株CT26增殖、凋亡及Caspase-3、p53蛋白表达的影响.方法 ①ZOL对CT26细胞增殖的影响观察:将CT26细胞分为对照组和实验组,实验组细胞分别加入1、20、50、120、150、250μmol/L的ZOL,对照组不加ZOL,采用MTS法测算细胞增殖率.②ZOL对CT26细胞凋亡的影响观察:加入终浓度分别为0、1、10、100、200、300 μmol/L的ZOL孵育CT26细胞24 h,采用流式细胞术测算细胞凋亡率.③ZOL对CT26细胞中Caspase-3、p53蛋白表达的影响观察:将CT26细胞分为实验组与对照组,实验组加入终浓度为200 μmol/L的ZOL,对照组不加ZOL,分别于12、24、36、48 h后采用Western blotting法检测Caspase-3、p53蛋白.结果 1、20、50、120、150、250 μmol/L的ZOL处理CT26细胞后,细胞增殖率分别为83％、68％、65％、61％、59％、55％,20、50、120、150、250 μmol/L组与1μmol/L 组相比,P均＜0.05.0、1、10、100、200、300 μmol/L的ZOL作用后,CT26细胞凋亡率分别为9％、23.06％、23.73％、26.12％、27.15％,1、10、100、200、300 μmol/L组与0μmol/L组相比,P均＜0.05;实验组加药36、48 h后,细胞中Caspase-3、p53蛋白相对表达量高于对照组(P均＜0.05).结论 ZOL可抑制结肠癌细胞存活,促进其凋亡,作用机制可能与上调Caspase-3、p53蛋白表达有关.
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天然药物IHA-01筛选敏感肿瘤细胞株及其对结肠癌细胞增殖的影响
目的 筛选出对天然药物IHA-01的敏感肿瘤细胞,并对其抗瘤机制进行初步研究.方法 体外培养12种人肿瘤细胞株,经3.125、6.25、12.5、25和50 μg/ml 5个浓度IHA-01作用48 h后光镜下观察细胞株形态变化,采用CCK-8法计算IC50值(半数抑制浓度),确认敏感细胞株及佳作用浓度.流式细胞仪检测IHA-01佳作用浓度下敏感细胞株细胞凋亡情况及端粒酶活性.结果 5个浓度IHA-01均能抑制12种癌细胞增殖,确定结肠癌HCT--8细胞为敏感细胞(IC50值低),佳作用浓度为1.29 μg/ml:鼻咽癌CNE-2细胞为不敏感细胞(IC50值高).1.29 μg/ml的IHA-01作用后HCT-8细胞凋亡率明显高于、端粒酶活性明显低于CNE-2细胞(P均＜0.01).结论 IHA-01对HCT-8细胞有较强的抑制作用:其机制可能为诱导肿瘤细胞凋亡及抑制细胞端粒酶活性.
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SEA诱导人PBMC对结肠癌Caco-2细胞的杀伤效果观察
目的 通过蛋白注入和基因转染两种形式,观察金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)诱导人外周血单核细胞(PBMC)对结肠癌Caco-2细胞的杀伤效果.方法 密度梯度离心法分离PBMC,用不同浓度SEA诱导;MTT法测定PBMC对Caco-2细胞的杀伤率;用阳离子脂质体法将重组质粒pEGFP-N1-SEA转染至Caco-2细胞,检测PBMC对该细胞的杀伤率.结果 在一定范围内,随着SEA浓度的升高,PBMC对Caco-2细胞的杀伤率显著上升,在36 h、高效靶比、高SEA浓度的情况下,杀伤率可达57.23%;将pEGFP-N1-SEA转染至Caco-2中,转染效率达55%,同时能显著提高PBMC的杀伤率,转染60 h后杀伤率可达54.62%.结论 通过蛋白注入和基因转染两种形式,SEA均能诱导并增强PBMC对Caco-2细胞的杀伤效果.
关键词： 金黄色葡萄球菌肠毒素A 外周血单核细胞 结肠癌细胞 阳离子脂质体 -
pBabe-GLS1真核表达载体构建及其对结肠癌细胞增殖、谷氨酰胺摄取的影响
目的 构建pBabe-GLS1真核表达载体,观察谷氨酰胺酶1(GLS1)对结肠癌细胞增殖及谷氨酰胺摄取的影响.方法 运用反转录PCR扩增GLS1基因片段,通过BamHⅠ和SalⅠ双酶切目的片段并通过T4 DNA连接酶将GLSⅠ基因连接至pBabe真核表达载体中;经BamHⅠ和SalⅠ双酶切法、PCR法测序鉴定重组DNA分子;转染组将构建的pBabe-GLS1真核表达载体瞬时转染结直肠癌HT29细胞,阴性对照组转染空质粒pBabe,采用Western blotting法检测GLS1蛋白表达,通过谷氨酰胺含量检测试验和蛋白定量实验检测其对结肠癌细胞的生物学影响.结果 成功构建了pBabe-GLS1真核表达载体,且在HT29细胞中高表达GLS1蛋白;转染组HT29细胞增殖能力高于阴性对照组(P<0.05),对谷氨酰胺的摄取能力增加(P<0.05).结论 成功构建了pBabe-GLS1真核表达载体,构建的pBabe-GLS1真核表达载体能促进结肠癌细胞增殖及谷氨酰胺摄取.
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Genistein对结肠癌细胞HT-29增殖、凋亡的影响及机制探讨
目的 观察金雀异黄素(Genistein)对结肠癌细胞HT-29增殖、凋亡的影响,并探讨其作用机制.方法 将HT-29细胞分别加入6.25、12.5、25、50、100 μg/mL的Genistein进行培养,观察其生长、增殖、凋亡情况并检测其中的Bcl-2、Bax蛋白.结果 25、50μg/mL的Genistein作用48 h后,HT-29细胞的生长受抑制,凋亡率上升(P均＜0.01),Bcl-2蛋白表达下降(P均＜0.01),Bax蛋白表达上升(P均＜0.01),呈剂量依赖性(P＜0.05).各浓度的G enistein作用48 h后对HT-29细胞的增殖有抑制作用,并呈剂量和时间依赖性(P均＜0.05).结论 Genistein既可以抑制HT-29细胞的生长及增殖,又可以诱导其凋亡,其作用机制可能与其上调HT-29细胞Bax蛋白以及下调Bcl-2蛋白的表达有关.
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黄连和吴茱萸不同配比对结肠癌细胞株CT-26的影响
目的 比较黄连、吴茱萸不同配比的水提物对结肠癌细胞CT-26增殖、迁移和凋亡的影响,从而找出两药的佳配比.方法 采用MTT试验、克隆形成试验、细胞划痕试验、流式细胞术观察不同配比(黄连:吴茱萸比例为1:6、2:5、3:4、4:3、5:2、6:1以及两药单独作用)的水提物对CT-26细胞增殖、迁移和凋亡的影响. 结果 黄连、5:2、6:1组对细胞增殖的抑制作用明显,6:1组作用6 h后即产生抑制作用,12、24、48 h的细胞增殖抑制率均大于5:2组和黄连组,且差异有统计学意义(P<0.01),6:1、5:2 和黄连组作用48 h后的增殖抑制率分别达到(80.39± 2.72)%、(56.34±12.57)%、(62.71±5.46)%,且黄连、吴茱萸配伍对细胞增殖的抑制作用存在时间依赖性和剂量依赖性. 随着配比中黄连比例的增加,克隆形成率逐渐降低,2:5、3:4、4:3、5:2、6:1、黄连组的集落形成率与空白对照组相比差异均有统计学意义(P<0.01). 划痕实验结果表明黄连组和6:1组作用24 h后,与空白对照组相比能够明显抑制划痕愈合的程度.流式细胞仪PI单染亚二倍体峰分析结果显示,随着配比中黄连比例的增加,细胞凋亡率上升,作用24 h后黄连和6:1 组的细胞凋亡率分别达到(31.05±1.34)%、(35.09±3.72)%,且两者差异有统计学意义(P<0.05). 结论 黄连、吴茱萸配伍对结肠癌细胞CT-26的增殖、迁移和凋亡均有一定的抑制作用,其中以配比为6:1时作用显著.
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结肠癌细胞OPN和HIF-1a基因表达水平与结肠癌恶性生物学行为的关系
目的 探讨结肠癌细胞OPN和HIF-1a基因表达水平与结肠癌细胞恶性生活学行为的关系.方法 培养人结肠癌细胞,采用荧光定量PCR法检测患者细胞中OPN和HIF-1a的表达水平,并检测细胞增殖、迁移、侵袭功能.结果 腺病毒转染后12 h、24h、36 h、48 h,rad-OPN组和rAd-HIF-1a组细胞中OPN和HIF-1a基因表达mRNA含量均高于rAd-NC组,rAd-OPN组和rAd-HIF-1a组细胞迁移率均高于rAd-NC组,rad-OPN和rad-HIF-1a组的穿膜细胞数目均多于rAd-NC组,以上差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 OPN和HIF-1a基因高表达的重组腺病毒能够抑制结肠癌恶性生物学行为.
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过表达CHD1L基因对结肠癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响
目的 初步探索人CHD1L基因在结肠癌细胞中的生物学功能.方法 取肝癌患者手术切除肝癌标本并提取总RNA逆转录为cDNA,扩增CHD1L基因CDS序列,插入pLVX-puro慢病毒质粒,脂质体感染人SW480结肠癌细胞.Puro筛选建立稳定转染细胞株.免疫印迹证实CHD1L基因在SW480结肠癌细胞高效表达.CCK-8方法检测SW480结肠癌细胞增殖,Transwell方法检测SW480结肠癌细胞侵袭和迁移.结果 Western blot证实成功构建pLVX-CHD1L-puro重组质粒及CHD1L基因成功在SW480结肠癌细胞中高效稳定表达,且CHD1L基因能够促进SW480结肠癌细胞过度增殖、侵袭和迁移.结论 过度表达CHD1L基因显著促进SW480结肠癌细胞增殖、侵袭和迁移.
关键词： 染色质解旋酶DNA结合蛋白1样基因 增殖 迁移 结肠癌细胞 -
IL-1β及IL-1ra对结肠癌细胞表达uPA的影响
目的 研究白细胞介素(IL)-1β和白细胞介素受体拈抗剂(IL-1 ra)对结肠癌细胞表达uPA的影响,探讨IL-1β对结肠癌细胞迁移能力的影响.方法 体外培养人结肠癌细胞,加入IL-1β和IL-1ra,应用半定量逆转录-聚合酶链反应方法,比较不同处理组结肠癌细胞中uPA mRNA的表达.结果 IL-1β可促进结肠癌细胞的生长增殖,上调uPA mRNA的表达,呈一定的剂量效应关系;在时间系列组中,可检测到uPA mRNA的表达,以24 h表达高.IL-1ra可以抑制IL-1β对uPA mRNA表达的上调作用.结论 IL-1β促进结肠癌细胞生长增殖,刺激结肠癌细胞uPA高表达,从而促进结肠癌的迁移,IL-1ra可抑制IL-18的作用.
