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丁酸钠和阿司匹林对结肠癌细胞小肠三叶肽表连的影响
目的:丁酸钠(Bu)和阿司匹林(As)均对结肠癌具有预防作用,而小肠三叶肽(ITF)对胃肠黏膜有保护作用,有助于胃肠黏膜损伤和炎症的修复.本实验的目的在于明确Bu和As对结肠癌细胞SW480 ITF表达的影响.方法:用原位杂交的方法检测不同浓度(1 mm、2mm、5mm)Bu和As单独和联合作用前后SW480细胞中ITFmRNA的表达.设立不加Bu和As的对照组.统计方法采用方差分析.以P＜0.05为差异显著标准.结果:As及Bu均可使SW480细胞ITFmRNA表达减少,各组与对照组之间差异显著(As1,2,5 mM组vs对照组P值分别为0.019,0.039,0.046;Bu1,2,5 mM 组vs对照组P值分别为0.038,0.022,0.007;As+Bu1,2,5mm组vs对照组P值分别为0.039,0.030,0.025).As+Bu组与单独应用As或Bu组间差异亦显著(As+Bu1 mm组vsAs1 mM组P=0.045,vsBu1mM组P=0.040;As+Bu2mM组vsAs2mM组P=0.039,vsBu2mM组P=0.046;As+Bu5mM组vsAs5mM组P=0.015,vsBu5mM组P=0.032).As+Bu3个浓度组间随剂量加大其ITFmRNA表达逐渐减少,差异具显著性(As+Bu1mM组vs As+Bu2mM组P=0.042,vs As+Bu5mM组P=0.017,As+Bu2mM组vs As+Bu5mM P=0.026).但Bu或As3个浓度组间差异均无显著性(P＞0.05).结论:Bu及As均可抑制SW480细胞ITFmRNA的表达,且两者具协同效应.有关其意义以及ITF在肿瘤中的作用尚需进一步研究.
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尼美舒利对结肠癌细胞ICAM-1 mRNA表达的影响
目的:初步研究尼美舒利对培养结肠癌细胞生长及其ICAM-1 mRNA表达的作用.方法:以人结肠癌细胞株H-T-29,HCT-116为研究对象,体外药物敏感试验(MTT)法检测尼美舒利对肿瘤细胞的增生抑制效应;RT-PCR方法检测尼美舒利作用前后细胞ICAM-1 mRNA表达的变化.结果:尼美舒利对结肠癌细胞HT-29、HCT-116生长抑制作用呈时间、剂量依赖性方式,对HT-29细胞抑制效果强于HCT-116细胞.尼美舒利下调HT-29细胞ICAM-1mRNA表达,而对HCT-116细胞ICAM-1 mRNA的表达无显著作用.结论:尼美舒利可明显抑制结肠癌细胞HT-29生长,提示NIM可能通过抑制COX-2酶活性,下调细胞ICAM-1的表达,从而降低癌细胞播散及转移几率.
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前药热化疗对转CD基因结肠癌细胞SW480的作用机制
目的:探讨5-氟胞嘧啶(5-fluorocytosine,5-FC)热化疗对转染组织特异性胞嘧啶脱氨基酶(cytosine deaminase,CD)基因的大肠癌细胞SW480的作用及机制.方法:脂质体法将CEA基因顺式转录调控序列(TRS)驱动CD基因的组织特异性逆转录病毒载体G1CEACDNa转导入大肠癌细胞SW480,以G418筛选阳性克隆扩增后,采用水浴加温法,43℃作用30 min共3次,同时给予前药5-FC进行敏感试验;RT-PCR法检测目的基因的表达,MTT法检测细胞存活率,电镜检测细胞的形态学变化,流式细胞术检测细胞周期变化及凋亡.结果:SW480-CEACD细胞在43℃作用30 min共3次条件下,CD基因能稳定表达;热疗本身对SW480细胞有一定的杀伤作用(P＜0.05),转CD基因后,SW480细胞对5-FC的敏感性明显提高(P＜0.01),热疗与前药5-FC合用,对SW480-CEACD的杀伤作用显著大于对未转基因细胞的杀伤作用(P＜0.01,t=4.356,n=9),亦大于单独应用5-FC时对SW480-CEACD细胞的杀伤作用(P＜0.05,t=2.376,n=9),增加了SW480-CEACD细胞对5-FC的敏感性,电镜及流式细胞术检测显示,细胞死亡以细胞凋亡为主,前药热化疗导致结肠癌细胞SW480产生G1期阻滞,凋亡细胞比例增加.结论:热疗与前药5-FC联合应用,导致结肠癌细胞SW480产生G1期阻滞,细胞凋亡比例增加,提高了CEA组织特异性CD/5-FC系统的靶向性杀伤作用.
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抑瘤基因NGX6对人结肠癌细胞HT-29生长的影响
目的:NGX6是新克隆的侯选抑瘤基因,其在结肠癌组织中表达明显下调,提示NGX6的差异表达与结肠癌发生有关.本文通过研究NGX6对人结肠癌细胞HT-29生物学特性的影响以明确NGX6在结肠癌发生发展中的作用.方法:脂质体介导pcDNA3.1(+)/NGX6重组体转染低表达NGX6的人结肠癌细胞HT-29,Dot blot及RT-PCR方法检测外源性NGX6基因的表达,借助生长曲线、MTT、软琼脂集落形成、流式细胞仪、裸鼠成瘤实验对NGX6转染前后人结肠癌细胞HT-29的生物学行为进行检测.结果:pcDNA3.1(+)/NGX6/HT-29组细胞生长速度比pcDNA3.1(+)/HT-29和HT-29组明显减慢(P＜0.05),其倍曾时间为345 h比pcDNA3.1(+)/HT-29(27.1 h)和HT-29(23.0 h)延长;pcDNA3.1(+)/NGX6/HT-29组软琼脂集落形成率较对照组明显下降(P＜0.05);流式细胞仪检测NGX6高表达能延缓HT-29细胞周期由G0/G1期→S期的进程;裸鼠成瘤实验表明pcDNA3.1(+)/NGX6/HT-29组成瘤受抑.结论:NGX6的重表达可逆转人结肠癌细胞HT-29的恶性表型;NGX6是极具前途的结肠癌相关抑瘤基因侯选者.
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胃泌素拮抗剂增加CD自杀基因对结直肠癌细胞的杀伤作用
目的:研究联合应用胃泌素拮抗剂和胞嘧啶脱氨酶(CD)的基因治疗对结肠癌细胞的杀伤作用.方法:脂质体法转染G1CEACDNa至LoVo细胞.用含1mmol/L5-FC或/和1×10-8mmol/L CI-988的100ml/L胎牛血清的RPMI1640培养基培养细胞,测生长曲线;MTT法测细胞杀伤率;透射电镜观察细胞的超微结构;流式细胞仪annexin V和PI双重染色行凋亡相关检查;Balb/c裸鼠背部皮下接种CD+LoVo细胞,5-FC(500mg/kg)腹腔注射或/和CI-988(10mg/kg)灌胃处理20 d,处死裸鼠后肿瘤称重,病理切片HE染色,瘤组织透射电镜检查.结果:用5-FC或/和CI-988处理6 d后CD+LoVo细胞抑制率分别为90%和50%,二者合用于3 d和6 d抑制率分别为40%和97%;MTT法检测联合应用5-FC和CI-988较单用任何一种处理对CD+LoVo细胞杀伤作用更强,有统计学差异(0.53±0.05 vs 0.49±0.02,0.38±0.06,F=29.5536,n=5,P＜0.01);电镜和流式细胞仪分别显示CD/5-FC和CI-988结合处理72 h后细胞有凋亡现象;用5-FC(500 mg/kg)腹腔注射和CI-988(10 mg/kg)灌胃处理荷瘤裸鼠均可出现明显的抑瘤作用,抑瘤率分别为69.4%和495%,二者合用抑瘤较单用任一种处理更明显,有统计学意义(0.42±0.12 vs0.69±0.11,1.22±0.22,F=33.1709,n=5,P＜0.05),抑瘤率达81.5%,电镜下见瘤组织内有凋亡小体.结论:联合应用胃泌素拮抗剂CI-988可以提高CD/5-FC对结肠癌细胞的杀伤作用.凋亡相关过程可能是这种协同作用的原因.
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CD/5-FC系统对结肠癌细胞的杀伤作用
目的:探讨组织特异性胞嘧啶脱氨基酶(cytosine deaminase,CD)/5-氟胞嘧啶(5-fluorocytosine,5-FC)系统对不同分泌癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)的大肠癌细胞LoVo和SW480的靶向杀伤作用.方法:脂质体法将CEA基因顺式转录调控序列(TRS)驱动CD基因的组织特异性逆转录病毒载体GICEACDNa及非组织特异性逆转录病毒载体pCD2分别转导入大肠癌细胞LoVo和SW480,以G418筛选阳性克隆扩增后给予前药5-FC进行敏感试验.结果:LoVo-CEACD及LoVo-CD比LoVo对5-FC的敏感性明显提高(P＜0.01,t=5.688,n=9;P＜0.01,t=3.136,n=9),SW480-CEACD及SW480-CD比SW480对5-FC的敏感性明显提高(P＜0.01,t=3.437,n=9;P＜0.01,t=3.516,n=9),LoVo-CEACD比LoVo-CD对5-FC的敏感性明显增强(P＜0.05,t=2.183,n=9),而SW480-CEACD对5-FC的敏感性小于SW480-CD,SW480-CEACD对前药5-FC的敏感性低于LoVo-CEACD(P＜0.05,t=2.504,n=9),转CD基因之LoVo和SW480细胞体外实验均可观察到明显的旁观者效应.结论:组织特异性CD/5-FC系统对LoVo和SW480细胞均有明显的靶向杀伤效果,但对SW480细胞的杀伤作用小于LoVo细胞.
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大肠癌细胞功能性Fas配体的表达度与肿瘤免疫逃逸的关系
目的:表达Fas配体(fasligand,FasL)的肿瘤周围激活的Fas阳性淋巴细胞凋亡异常增加.肿瘤的发生在很大程度上是因为转化的细胞不能正常凋亡所致.观察Fas与FasL在结肠癌细胞株的表达,在体外验证结肠癌细胞SW620是否可以诱导淋巴细胞发生凋亡.方法:用免疫组织化学SABC法观察结肠癌细胞系和Jurkat T淋巴细胞系Fas与FasL的表达,为癌细胞的Fas和FasL的功能提供形态学依据.采用非放射性细胞毒分析,测定SW620结肠癌细胞与Jurkat靶细胞共培养后LDH释放值检测效应细胞的杀伤效应.结果:结肠癌SW620细胞FasL染色呈阳性反应,阳性反应物主要定位于癌细胞的胞膜及核周区,而Fas染色几乎呈阴性反应.Jurkat细胞系Fas,FasL免疫组化染色呈阳性反应,阳性反应物主要定位于癌细胞的胞膜.CytoTox96非放射性细胞毒分析显示大肠癌SW620细胞系与激活的T细胞(Jurkat T细胞)共培养,诱导对Fas介导的凋亡敏感的T淋巴细胞(Jurkat T细胞)明显凋亡,并随着SW620接种浓度增加和共培养时间的延长,Jurkat T细胞凋亡的比例显著增加.用含有乙酸肉豆佛波醇(phorbol 12-myristatel3-ac-etate,PMA)加离子霉素(ionomycin)的DMEM培养基孵育48 h的大肠癌SW620细胞系与激活的T细胞(Jurkat T细胞)共培养,Jurkat T细胞凋亡的比例也明显增加.结论:结肠癌细胞SW620表达功能性FasL,能杀伤Fas阳性Jurkat T淋巴细胞,形成免疫逃逸.
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ALA-PDT对SW480结肠癌细胞周期阻滞作用及对G1/S关卡调控因子的影响
目的:了解光动力疗法对结肠癌SW480细胞的周期阻滞作用与G1/S关卡调控因子之间的联系.方法:对体外培养的SW480结肠癌细胞进行ALA-PDT实验,使用流式细胞仪技术观测基于δ-氨基乙酰丙酸的光动力疗法对SW480细胞的细胞周期阻滞作用,应用免疫细胞化学技术检测光动力疗法对G1/S关卡调控因子Chk2,P21WAFl/Cipl/Sdil,CyclinDl蛋白表达的影响.结果:基于δ-氨基乙酰丙酸的光动力疗法可在其作用后早期诱导SW480细胞产生G0-G1细胞周期阻滞,G0/G1期比例显著增加,而S期和G2/M期比例明显下降,且呈时间依赖性变化;光动力作用诱导SW480细胞G1/S关卡调控因子Chk2,P21WAFl/Cipl/Sdil蛋白表达增高,降低CyclinDl蛋白表达,与G1/S期阻滞进程相一致,均呈时间依赖性变化.结论:基于δ-氨基乙酰丙酸的光动力疗法可诱导SW480细胞产生Go-G1细胞周期阻滞,光动力疗法对SW480细胞的Go-G1期阻滞作用与其对多个G1/S关卡调控因子的调节事件有关.
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丝裂霉素C处理代替γ-辐射在疫苗制备中的应用研究
在自体肿瘤疫苗制备过程中为防止接种部位发生人工种植，需对肿瘤细胞进行灭能处理。常用方法为γ-照射［1］，但所需Gammacell辐射仪价格昂贵，不适于常规应用。为此我们探索用丝裂霉素C（MMC）进行化学处理代替γ-辐射的可行性。材料与方法 一、材料 1. 主要试剂：人肺腺癌细胞系A549人乳腺癌细胞系MCF7购自美国组织细胞库（ATCC），结肠癌细胞来自手术切除新鲜肿瘤组织。〔3H〕-胸腺嘧啶核苷、〔3H〕-尿嘧啶核苷、〔3H〕-混合氨基酸购自中国原子能研究所。MMC为日本KYOWA公司产品。 2. 动物：5周龄雌性裸鼠(购自中国预防医学科学院动物中心)，共6只，实验组对照组各3只。 3. 仪器：1209 RACKBETA液闪仪为瑞士Pharmacia 公司产品。Gammacell-40辐射仪为加拿大MDS Nordion公司产品。 二、方法 1.〔3H〕-掺入：收集5×105细胞，不同剂量MMC处理60min，Hanks液洗涤去除MMC，或60μg/ml MMC处理60min、Hanks液洗涤去除MMC之后加正常培养基，MMC处理后分别于0、1、3、6、12、24h取细胞，加入标记核苷或氨基酸，每孔37k Bq，37℃ 5%的CO2孵育3h，细胞收集器收集细胞于whatman滤纸，分别用双蒸水洗涤2次、5%三氯醋酸固定、75%、100%的酒精脱水、烘干，加液闪液上机检测。 2.γ-照射：收集一定数量的细胞，将细胞置冰浴中，Gammacell辐射仪200Gy照射，照射后分别于0、1、3、6、12、24h取细胞进行〔3H〕-掺入实验。 3.裸鼠荷瘤：收集1×107乳腺癌细胞MCF7，MMC 60μg/ml处理1h，洗涤、离心后于实验组裸鼠腋下接种，对照组未经处理直接接种，2周后观察成瘤情况
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橄榄苦苷的抗结肠癌作用机制
【据《Nutr Cancer》2013年1月报道】题：一种来源于橄榄树的裂环烯醚萜-橄榄苦苷通过下调HIF-1α抑制结直肠癌细胞增殖（作者Cárdeno A等）
橄榄苦苷是橄榄树果实中主要的酚类化合物，尽管其显示出有效的抗癌活性，但大部分作用机制尚不清楚。西班牙塞维利亚大学药学院的研究人员评估了橄榄苦苷和其水解产物羟基酪醇对人结肠癌细胞HT-29的影响，并且阐明了橄榄苦苷抗癌的相关分子机制。研究人员通过细胞活力测定以明确HT-29细胞增殖，流式细胞术评估其细胞周期与细胞凋亡，并且利用蛋白印迹法观察了丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）级联蛋白表达变化及低氧诱导因子1α（HIF-1α）、抑癌基因p53、过氧化物酶体增殖蛋白激活性受体γ（PPARγ）和核因子κ（NF-κB）信号通路的变化。 -
协同刺激分子B7-H3在结肠癌细胞株中的表达水平及其分布特征
目的 研究协同刺激分子B7-H3在结肠癌细胞株中的表达及其细胞内亚细胞结构的分布特征.方法 分别采用Real-time PCR、Westem Blot方法检测B7-H3在三株结肠癌细胞SW620、SW480、DLD-1中mRNA和蛋白质的表达水平；激光共聚焦显微镜观察B7-H3分子在三株结肠癌细胞中的亚细胞定位.结果 SW620、SW480、DLD-1 Real-time PCR的B7-H3 mRNA ACt值分别为21.11 ±0.07、21.18±0.39、21.45 ±0.18,F=1.3497,P=0.309;Western Blot检测B7-H3蛋白的表达水平无明显差别；B7-H3分子细胞核内的表达比例分别为0.462±0.07、0.329±0.039、0.411 ±0.025.SW480细胞B7H3核内分布比例与另两株细胞有明显差异(P＜0.05).结论 不同结肠癌细胞株中B7-H3 mRNA与蛋白的表达水平无明显差异,细胞核内有部分B7-H3分子表达,且不同细胞株之间B7-H3的核内表达有一定差异.
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γ-synuclein对结肠癌细胞系体外生物学行为影响的观察
目的:构建针对人γ-synuclein基因的shRNA真核表达载体,观察γ-synuclein基因对人结肠癌细胞系体外生物学行为的影响.方法:根据人γ-synuclein序列设计并构建γ-synuclein基因的shRNA真核表达载体,以脂质体转染的方法将γ-synuclein干扰质粒转染至人结肠癌细胞株HCT116,经G418筛选出稳定转染的细胞株.应用CCK8法检测γ-synuclein干扰对HCT116细胞增殖的影响,软琼脂克隆形成实验检测细胞体外克隆形成能力,细胞划痕实验检测细胞体外迁移能力,Transwell小室法检测细胞体外侵袭能力.结果:经测序证明γ-synuclein的shRNA序列已成功插入pGCsi-U6/neo/GFP质粒中,构建的干扰质粒能够显著抑制γ-synuclein mRNA及蛋白的表达.γ-synuclein受抑制后,HCT116细胞增殖数目从48 h后开始减少,持续72 h,与空质粒组及未转染组相比,差异均有统计学意义,P＜0.05.siRNA组细胞克隆形成率为(9.6±2.9)％,显著低于未转染组的(29.4±4.5)％和空质粒组的(32.1±5.8)％,差异均具有统计学意义,P＜0.05.在细胞划痕实验中,γ-synuclein被抑制后细胞划痕损伤愈合的速度明显减慢.在侵袭实验中,穿过Matrigel胶及Transwell小室膜的siRNA组侵袭细胞数为20.1±5.26,显著低于未转染组的100和空质粒组的105.4±12.5,差异均有统计学意义,P＜0.05.结论:干扰γ-synuclein的表达可显著抑制结肠癌细胞体外增殖、克隆形成和迁移侵袭能力.
关键词： 结肠癌细胞 γ-synuclein shRNA 生物学行为 -
细胞周期调控在HT 29结肠癌细胞低剂量辐射超敏感性中作用的研究
低剂量辐射超敏感性是细胞对低剂量照射(0.02～0.50 Gy)较敏感,但对其后剂区域(0.50～1.00 Gy)敏感性下降.其发生机制现不清楚,可能与细胞周期调控有关[1-2].笔者观察HT 29结肠癌细胞放射敏感性与γ线照射剂量关系,分析不同剂照射后细胞周期调控变化及Phos-pho-Cdc25C(Ser216)蛋白表达情况,探讨低剂量辐射超敏感性机制.
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胞嘧啶脱氨酶基因联合5-Fc治疗结肠癌的实验研究
目的研究胞嘧啶脱氨酶基因(CD)联合前体药物5-氟胞嘧啶(5-Fc)对结肠癌细胞的生长抑制作用.方法应用逆转录病毒介导的方法,将逆转录病毒载体pLXSN中含有大肠杆菌CD基因的重组质粒pCD2转染到病毒包装细胞PA317后, 感染人结肠癌细胞株SW1116.对转基因的细胞进行RT-PCR检测和体内外药物敏感实验.结果获得了稳定表达EC-CD基因的结肠癌细胞株SWCD2,与野生型SW1116细胞相比,SWCD2细胞对基本无毒性的原药5-Fc的敏感性增加, 50%细胞生长抑制率(IC50)浓度由野生型SW1116细胞的16 000μmol/L降低到SWCD2的66μmol/L.经5-Fc治疗后,SWCD2细胞的裸鼠移植瘤生长明显缩小.结论 CD基因联合5-Fc对人结肠癌细胞具有实验性基因治疗作用.
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沉默Rev1基因对人结肠癌细胞放射敏感性的影响
目的 探讨沉默Rev1基因对人高分化结肠癌细胞THC8307 X射线照射后增殖、凋亡的影响.方法 利用RNA干扰技术将Rev1基因的特异性片段转染THC8307细胞,用实时荧光定量PCR和Western blot检测转染后细胞中目的基因的表达;实验分空白对照组、阴性对照组、Rev1 siRNA组.分别给予0、6 GyX射线照射,运用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测不同时段(0、24、48、72、96 h)细胞增殖情况,并绘制增殖曲线;流式细胞仪(FCM)检测不同剂量X射线处理后的细胞凋亡;Western blot检测各组PCNA、γ-H2AX、P53、Bax、Bcl-2蛋白的表达.结果 与空白对照组相比,6 GyX射线照射后,沉默Rev1基因组细胞增殖速率明显降低(t=7.53,P＜0.05),凋亡明显增加(t =6.23,P＜0.05),增殖细胞抗原(PCNA)表达下降(t=4.39,P＜0.05),γ-H2AX表达升高(t=5.48,P＜0.05),P53表达升高(t=5.09,P＜0.05)、Bax表达升高(t=3.32,P＜0.05)、Bcl-2表达降低(t =6.13,P＜0.05).结论 沉默Rev1基因,抑制了X射线作用下的结肠癌细胞THC8307的增殖,促进了凋亡,增加了其对X射线的放射敏感性.
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三根祛瘤方对结肠癌SW480细胞环氧化酶-2及核因子-κB的影响
目的探讨三根祛瘤方(简称三根方)对结肠癌细胞的作用机制.方法:采用不同浓度的三根方处理结肠癌SW480细胞后,以四唑盐比色试验检测细胞增殖,以western blot检测环氧化酶-2蛋白水平,采用凝胶迁移率法检测核因子-κB活性.结果:三根方对结肠癌SW480细胞增殖具有较强的抑制作用.三根方能抑制环氧化酶-2蛋白水平的表达及抑制核因子-κ B活性,且呈浓度依赖性.结论:三根方能够抑制结肠癌细胞的恶性增殖,其机制与抑制环氧化酶-2基因的表达及核因子-κ B活性有关.
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西达本胺对结肠癌细胞能量代谢的调节作用
目的：考察西达本胺对结肠癌细胞HCT-8和HT-29能量代谢调节的作用。方法西达本胺5，10和20μmol· L-1分别处理HCT-8和HT-29细胞，普通光学显微镜观察细胞形态变化，MTT法检测细胞存活，荧光细胞活性试剂盒检测ATP含量，糖酵解压力试剂盒检测代谢变化，荧光定量PCR和Western蛋白印迹法分别检测糖酵解关键酶乳酸脱氢酶A（LDH-A）在mRNA水平和蛋白水平的表达。结果与对照组相比，西达本胺处理组HCT-8和HT-29细胞形态不规则，出现变形、皱缩和细胞碎片，增殖抑制率显著升高（P<0.05）；西达本胺5和10μmol · L-1处理16 h，HCT-8和HT-29细胞内ATP总含量均无差异，而20μmol·L-1处理组ATP总含量显著降低（P<0.05）。西达本胺20μmol·L-1处理HCT-8和HT-29细胞16 h，有氧呼吸水平均无差异，而糖酵解ATP产生速率分别降低30.7%和37.9%（P<0.05）；LDH-A mRNA水平无差异，蛋白水平显著下调（P<0.01）。结论西达本胺具有抑制结肠癌细胞糖酵解能力的作用，可能与下调LDH-A有关。
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马齿苋醇提取物对结肠癌细胞及其干细胞体外增殖作用的机理研究
目的 探讨马齿苋醇提取物对结肠癌细胞及其干细胞体外增殖能力的影响及其作用机制.方法 对结肠癌干细胞进行无血清培养,CCK-8法测定不同浓度马齿苋醇提取物对结肠癌HT-29细胞及HT-29干细胞的生长抑制情况,流式细胞仪检测其对HT-29细胞及其干细胞的凋亡情况及对细胞周期的影响.RT-PCR法以及Western blot 分析马齿苋醇提取物对HT-29细胞及其干细胞Notch、Wnt双信号通路中Notch1、Notch2及β-catenin基因及蛋白表达的影响.结果 马齿苋醇提取物对HT-29细胞及HT-29干细胞增殖有抑制作用,其作用时间、剂量与细胞增殖抑制率呈正相关,且对HT-29细胞增殖的抑制作用及凋亡率的影响较HT-29干细胞显著(P<0.05).马齿苋醇提取物可下调HT-29细胞及其干细胞Notch1、β-catenin基因表达,并下调Notch1、Notch2及β-cate-nin蛋白表达(P<0.05).结论 马齿苋醇提取物可以通过下调Notch-1、Notch-2、β-catenin蛋白的表达发挥体外抑制结肠癌细胞及其干细胞增殖的作用.
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特异性小干扰RNA抑制诱骗受体3在结肠癌SW480细胞表达的研究
目的 研究特异性小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对诱骗受体3(decoy receptor 3,DcR3)基因在人结肠癌SW480细胞系中的抑制作用.方法 设计特异性的DcR3 siRNA序列;构建DcR3的pSUPER表达质粒并鉴定,鉴定成功后用于转染SW480细胞.以RT-PCR的方法检测细胞转染后DcR3 mRNA的表达;以Western blotting的方法检测DcR3蛋白的表达情况,并作统计学处理.结果 与对照组相比,本实验设计两段siRNA对SW480细胞中DcR3 mRNA及蛋白表达的抑制作用明显,实验细胞DcR3 mRNA及蛋白表达显著下降(P<0.01).结论 针对DcR3的siRNA质粒转染真核细胞后可抑制其mRNA及蛋白表达,为进一步探讨DcR3的功能及封闭DcR3基因表达而治疗肿瘤奠定了实验基础.
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中药姜黄对结肠癌细胞FAK表达调控及抗肿瘤转移的研究
直结肠癌(Colorectal cancer,CRC)是全球人类常见的恶性肿瘤之一,每年全球新发病例数大约为1百万左右[1],CRC在癌症患者死亡原因中占第三位,约每年死亡630,000人[2],特别是北美发达国家情况尤为严重,而且随着我国人民生活水平的提高,饮食习惯生活方式的改变,CRC发病率也逐年升高.
