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养血透骨法对肺癌化疗后患者免疫功能影响的临床研究
目的 观察透骨法对肺癌化疗后患者免疫功能的影响.方法 采用直接免疫荧光标记全血溶血法、流式细胞仪技术检测治疗前后肺癌化疗后患者外周血血清T细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+、CD4/CD8、NK细胞及巨噬细胞水平.结果 在提升肺癌化疗后患者免疫功能方面,治疗组明显优于对照组(P<0.01).结论 透骨养血法能明显提升肺癌化疗后患者的免疫功能,并能改善其化疗后的临床症状,提高肿瘤患者生存质量,毒副反应少,具有明显的疗效优势.
关键词: 养血透骨法 肺癌化疗后 直接免疫荧光标记全血溶血法 流式细胞仪技术 免疫功能 -
手术创伤对小儿T淋巴细胞CD69、HLA-DR的影响及意义
手术创伤后患儿细胞免疫功能调节紊乱,传统的观点认为,创伤可致淋巴细胞特别是T细胞的功能受抑,从而使机体的抗感染能力减弱.但另一方面,创伤也可激活T淋巴细胞.本研究采用流式细胞仪技术动态测定42例行体外循环手术的先天性心脏病患儿及11例普胸手术患儿围术期外周血T淋巴细胞表面活化分子CD69、人类白细胞抗原DR位点(HLA-DR)表达率的变化.结果见表1.
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ALA-PDT对SW480结肠癌细胞周期阻滞作用及对G1/S关卡调控因子的影响
目的:了解光动力疗法对结肠癌SW480细胞的周期阻滞作用与G1/S关卡调控因子之间的联系.方法:对体外培养的SW480结肠癌细胞进行ALA-PDT实验,使用流式细胞仪技术观测基于δ-氨基乙酰丙酸的光动力疗法对SW480细胞的细胞周期阻滞作用,应用免疫细胞化学技术检测光动力疗法对G1/S关卡调控因子Chk2,P21WAFl/Cipl/Sdil,CyclinDl蛋白表达的影响.结果:基于δ-氨基乙酰丙酸的光动力疗法可在其作用后早期诱导SW480细胞产生G0-G1细胞周期阻滞,G0/G1期比例显著增加,而S期和G2/M期比例明显下降,且呈时间依赖性变化;光动力作用诱导SW480细胞G1/S关卡调控因子Chk2,P21WAFl/Cipl/Sdil蛋白表达增高,降低CyclinDl蛋白表达,与G1/S期阻滞进程相一致,均呈时间依赖性变化.结论:基于δ-氨基乙酰丙酸的光动力疗法可诱导SW480细胞产生Go-G1细胞周期阻滞,光动力疗法对SW480细胞的Go-G1期阻滞作用与其对多个G1/S关卡调控因子的调节事件有关.
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CD28在肾综合征出血热患者外周血T淋巴细胞免疫表型的检测及意义
肾综合征出血热(HFRS)的免疫学发病机制尚未完全阐明.近年关于HFRS患者外周血T淋巴细胞亚群及免疫表型变化的研究受到关注并取得了一定的进展[1,2].本研究应用双色荧光单克隆抗体及流式细胞仪技术对HFRS患者外周血CD+8细胞毒性T细胞及CD28在该亚群表达的动态变化进行检测.探讨细胞免疫在HFRS发病机制中的作用.
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流式细胞仪检测呼吸道合胞病毒感染患儿的细胞因子反应及其临床意义
为探讨RSV感染与细胞因子反应类型之间的关系,我们于2000年9月至2001年4月应用流式细胞仪技术,对RSV感染患儿进行了外周血CD+4和CD+8 T淋巴细胞内IL-4/IFN-γ表达情况的检测研究,报告如下.
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NK细胞参与多发性硬化免疫致病的机制
目的研究多发性硬化(MS)患者外周血(PB)中自然杀伤(NK)细胞的表达. 方法采用流式细胞仪技术,检测15例MS患者以白细胞介素-12(IL-12)刺激NK细胞增殖前后PB NK细胞的百分率. 结果 MS患者PB中NK细胞百分率明显低于对照组(P<0.05);以不同浓度的IL-12刺激NK细胞增殖后NK细胞百分率呈剂量依赖性增加,于5 d时达到峰值,但较刺激前明显减少(P<0.05). 结论 MS患者PB中NK细胞的表达明显减少,以CD16+和CD56+细胞减少为主;IL-12在102 U/mL数量级时可对NK细胞增殖活性产生佳激活作用.
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小鼠几种细胞提取操作的心得
近年来随着流式细胞仪技术在医学科研领域的广泛应用,对单个细胞的提纯技术提出了更高的要求.笔者在实验过程中,先后尝试用不同方法提取小鼠脾细胞、骨髓细胞、成骨细胞、脑细胞用于流式细胞仪检测,取得了较好的实验效果.现把提取上述细胞的心得和方法与大家分享.
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血小板活化状态与肝硬化
目的:探讨肝硬化(LC)患者血小板功能的异常在其中的作用.方法:肝硬化35例,正常人30例,利用流式细胞仪技术检测.结果:LC患者和正常人血小板表面膜蛋白CD61、CD63、纤维蛋白原受体(PAC-1),分别为(78.27±30.23)、(3.52±6.01)、(4.32±3.28)和(42.18±14.92)、(0.51±0.34)、(0.36±0.31),LC患者比正常人明显升高(P<0.05,P<0.05,P<0.01).结论:CD61、CD63、PAC-1可以作为LC患者诊断及疗效观察的一个指标.
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免疫荧光技术和免疫酶标法在T淋巴细胞亚群检测中的应用体会
用McAb检测T淋巴细胞亚群的方法有多种,如生物素-亲和生物素-辣根过氧化物酶复合法,免疫金银法,免疫酶标法(APAAP法)、荧光抗体技术和流式细胞仪技术,其中FACS方法先进,但仪器价格昂贵,目前还只能在少数实验室使用.我们实验室目前使用的是荧光抗体技术和APAAP法,经反复摸索实验,将两种方法介绍如下.
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口腔阿弗它溃疡的病因探索
我们采用流式细胞仪技术来检验患者病变期外周血T细胞亚群的分布来对阿弗它溃疡的病因进行初步研究.
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免疫学方法检测急性白血病微小残留病变
急性白血病微小残留病变(MRD)是指经治疗达到完全缓解后,用传统形态学方法不能测出的体内残留微量白血病细胞。MRD在体内的存在范围很广,可在100~1010之间。一般认为MRD在105~1010时随时可导致复发,而MRD在105以下时即可依赖自身免疫机制控制残留瘤细胞。为了彻底根治白血病并避免盲目无意义的治疗,对MRD检测方法的研究具有重要意义。但由于MRD的分布、生长特点极为复杂,而且往往随着机体情况的变化而变化,因此能够随时、准确检测MRD相当困难。免疫学方法作为主要方法之一,发展迅速,已越来越受到人们的关注和承认〔1~3〕。本文对其发展过程及研究进展加以综述。
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肝癌患者PBMC的TNFR Ⅰ、Ⅱ的表达及治疗对表达率的影响
目的进一步了解肝癌患者的异常免疫状态,揭示免疫生物治疗可能的作用机制.方法用流式细胞仪技术和S-P一步法检测了30例健康成人和31例肝癌患者外周血单个核细胞(PBMC)的肿瘤坏死因子受体(TNFR)Ⅰ、Ⅱ的表达率以及生物治疗、化疗对表达率的影响.结果健康成人PBMC的TNFRⅠ、TNFRⅡ的表达阳性率分别为(38.54±8.51)%、(44.89±9.08)%;而肝癌患者分别为(28.35±9.09)%、(37.45±9.05)%,均显著低于健康成人(P<0.001).12例肝癌患者用LAK细胞1×109加IL-220万U/d治疗,连续用6 d,其PBMC的TNFRⅠ阳性率明显升高[(42.86±9.02)%,P<0.001];TNFRⅡ表达略有升高,但尚无统计学意义.结论肝癌患者存在明显的免疫异常,生物治疗具有一定的理论依据.
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颗粒抗原交叉呈递机制的初步研究
目的以噬菌体颗粒抗原为模式抗原,研究其交叉呈递的可能机制.方法将该抗原与巨噬细胞共培养后,采用流式细胞技术和共聚焦显微镜,进行了多肽-MHC-Ⅰ类分子复合物形成的动力学研究.进而,采用流式细胞技术研究了不同蛋白酶体抑制剂以及TAP对噬菌体颗粒抗原交叉呈递的影响.结果巨噬细胞负载重组噬菌体颗粒pC89hisOVA或pC89hisHa后,细胞质MHC-Ⅰ类分子-肽复合物很快形成(约5 h);并且该颗粒抗原的交叉呈递以TAP(transport associated protein,TAP)依赖的方式进行.MG132,lactacystin以及NH4Cl可以显著抑制胞内MHC-Ⅰ类分子-肽复合物的形成,而leupeptin或bestatin处理细胞却不影响该颗粒抗原的交叉呈递.结论噬菌体颗粒抗原交叉呈递是以TAP依赖的方式进行,并对多种蛋白酶体抑制剂敏感.
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免疫磁珠两步法分离大鼠脾脏CD4+CD25+调节性T细胞
目的探索利用磁性细胞分离(MACS)系统高效、快速地分离大鼠脾脏CD4+CD25+调节性T细胞.方法采用免疫磁珠两步法分离大鼠脾脏内的CD4+CD25+调节性T细胞, 首先采用"鸡尾酒"抗体和抗IgG磁珠阴性分选CD4+ T细胞,再用抗CD25-PE抗体和抗PE磁珠阳性分选获得CD4+CD25+T 细胞.分离后的细胞经流式细胞仪检测分离纯度; 台盼蓝染色检测细胞存活率; 体外增殖实验检测其对CD4+CD25-T细胞的免疫抑制作用.结果阴性分选获得的CD4+T细胞纯度为(83.6±2.5)%(79%~87%), 阳性分选后获得的CD4+CD25+T细胞纯度为(90.2±1.8)%(86%~93%), 细胞存活率为(92.8±3.4)%(92%~95%), 体外增殖实验表明,CD4+CD25+T细胞能明显抑制CD4+CD25-T 细胞的增殖(P<0.01). 结论采用MACS系统阴性加阳性分选可以高效、快速地获得理想纯度和有免疫抑制功能的大鼠CD4+CD25+调节性T细胞.
关键词: 磁性细胞分离 CD4+CD25+调节性T细胞 流式细胞仪技术 大鼠 -
严重烧伤大鼠中性粒细胞表面L选择素的表达
白细胞粘附在烧伤后炎症反应和脏器损害中起重要作用[1、2].粘附分子L选择素位于中性粒细胞、单核细胞等细胞上,它通过与分布在内皮细胞上的配体结合,介导白细胞-内皮细胞间粘附;通过与白细胞上配体结合,介导白细胞间粘附;并介导淋巴细胞归巢[2-3].笔者采用流式细胞仪技术,对大鼠烧伤后不同复苏条件下PMN上L选择素的表达进行了动态观察.