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免疫金银法在小鼠牙胚细胞外基质免疫组化研究中的应用
细胞与细胞间质之间相互作用在组织的发生、发育中的重要性已众所周知.胞外基质(ECM)在牙胚的形态发生和细胞分化方面起着重要作用.纤维粘连蛋白(Fibronectin,FN)是牙胚组织中的重要间质成分.为了观察FN在牙胚发育中的分布特征和变化,分析FN等间质与牙乳头细胞分化的关系,更好地进行胞外基质的观察,作者利用免疫组化技术,将免疫金银法(Immunogold silver staining,IGSS)和微波结合,用于小鼠牙胚FN的染色观察中,取得了较好的效果,现将方法介绍如下:
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免疫荧光技术和免疫酶标法在T淋巴细胞亚群检测中的应用体会
用McAb检测T淋巴细胞亚群的方法有多种,如生物素-亲和生物素-辣根过氧化物酶复合法,免疫金银法,免疫酶标法(APAAP法)、荧光抗体技术和流式细胞仪技术,其中FACS方法先进,但仪器价格昂贵,目前还只能在少数实验室使用.我们实验室目前使用的是荧光抗体技术和APAAP法,经反复摸索实验,将两种方法介绍如下.
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免疫金银法检测抗角质蛋白抗体的影响因素
目的:探讨免疫金银法检测抗角质蛋白抗体(AKA)的影响因素.方法:收集AKA阳性的类风湿性关节炎患者血清20份,同时收集20份正常健康者血清作为对照,采用免疫金银法检测上述血清AKA,检测中采用不同的封闭液、不同浓度的金标抗体、不同的显色时间,比较分析不同条件下免疫金银法检测AKA的阳性率及结果易判断程度,以确定较合适的检测条件.同时采用免疫荧光法检测AKA,比较2种方法检测AKA的敏感性.结果:以含10%~20%的羊血清及1%BSA的封闭液、1:80~1:320的金标抗体、10~15 min的显色时间为较合适的检测条件.免疫金银法检测AKA较免疫荧光法敏感性高,且差别有统计学意义.结论:免疫金银法检测AKA对类风湿性关节炎具有较高的敏感性和特异性,临床上用于类风湿性关节炎的辅助诊断具有较高的诊断价值.
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红细胞带 3 蛋白免疫电镜标记方法的建立
带3蛋白(band3)是红细胞(RBC)膜中含量较多的含糖内在蛋白,以跨膜形式存在,通过a-5个疏水性-螺旋区段多次贯穿于脂双层,其第五穿膜区外侧片段与阴离子(氯离子、碳酸氢离子)通透、抗原抗体反应、细胞衰老清除等生命活动有关.我们应用免疫电镜方法,尤其是率先将免疫金银法应用于band3扫描电镜(SEM)的免疫标记技术,为band3的研究提供了重要手段.
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2种方法检测抗核抗体对系统性红斑狼疮诊断价值的比较
目的 比较免疫金银法和免疫荧光法检测抗核抗体对系统性红斑狼疮(SLE)的诊断价值.方法 对SLE和其余6种自身免疫性疾病患者及健康人血清采用免疫金银染色法和间接免疫荧光法检测抗核抗体,并比较分析两种方法 检测抗核抗体对SLE诊断的敏感性、特异性、正确率、阳性预测值、阴性预测值、Youden肌指数等指标.结果 免疫金银法和免疫荧光法检测抗核抗体阳性率为:SLE患者100%和96%、类风湿关节炎患者10%和36%、强直性脊柱炎患者2%和13%、系统性硬皮病患者13%和73%、干燥综合征患者27%和82%、皮肌炎患者12.5%和37.5%、血管炎患者0%和17%、健康人0%和0%.统计分析显示免疫金银染色法检测抗核抗体对SLE诊断的特异性、正确率、阳性预测值及Youdenn指数较免疫荧光法高,且差异有统计学意义(P<0.05).结论 免疫金银法检测ANA对SLE具有高度的敏感性和特异性,因此临床上采用免疫金银法检测ANA用于对SLE的辅助诊断更有价值.