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免疫金银法在小鼠牙胚细胞外基质免疫组化研究中的应用
细胞与细胞间质之间相互作用在组织的发生、发育中的重要性已众所周知.胞外基质(ECM)在牙胚的形态发生和细胞分化方面起着重要作用.纤维粘连蛋白(Fibronectin,FN)是牙胚组织中的重要间质成分.为了观察FN在牙胚发育中的分布特征和变化,分析FN等间质与牙乳头细胞分化的关系,更好地进行胞外基质的观察,作者利用免疫组化技术,将免疫金银法(Immunogold silver staining,IGSS)和微波结合,用于小鼠牙胚FN的染色观察中,取得了较好的效果,现将方法介绍如下:
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VonKossa染色法和碱性磷酸酶的免疫组化染色法在牙齿矿化研究中的应用
牙齿的发育是一个长期复杂的连续过程.包括生长、矿化、萌出三个时期.其中矿化是指牙体硬组织形成的重要阶段.在这一生物矿化过程中,有文献报道钙盐的沉积与碱性磷酸酶活性有关.为证实这一论点,我们选择了钙质VonKossa及碱性磷酸酶的PAP免疫组化染色对小鼠牙胚进行不脱钙切片染色.现将本研究结果及实验过程中我们的一些经验体会与同道们进行交流.
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液泡分选蛋白4B在小鼠牙胚发育的时空表达
目的:研究液泡分选蛋白4B(vacuolar protein sorting 4B,VPS4B)在小鼠磨牙发育不同时期的表达.方法:取胚胎13.5、14.5、16.5 d的胎鼠头部及出生后2.5、7 d的幼鼠下颌骨组织,石蜡包埋后获取第一磨牙牙胚组织切片,通过组织化学染色确定各组牙胚的发育时期,免疫组织化学法检测牙胚中VPS4B的表达分布.结果:胚胎13.5、14.5、16.5 d小鼠第一磨牙牙胚分别处于蕾状期、帽状期、钟状早期,出生后2.5、7 d分别处于分泌期和矿化期;VPS4B表达于小鼠磨牙发育的整个过程,并在构成牙胚的多种细胞中有不同程度的表达.随发育的进行,成釉细胞和成牙本质细胞中VPS4B呈强阳性持续表达,而牙囊细胞表达逐渐减弱.结论:VPS4B表达于正常小鼠牙胚发育过程中且随发育进行表达发生改变,VPS4B可能参与牙胚的正常发育.
关键词: 小鼠牙胚 发育 免疫组化 液泡分选蛋白4B(VPS4B) -
上游刺激因子1在小鼠牙齿发育过程中表达的原位杂交研究
目的:检测小鼠牙齿发育中上游刺激因子1 mRNA的表达及时空分布模式.方法:制备E13, 16, 19, P1, 5, 8, 11, 21 d小鼠第一磨牙石蜡切片,用我们前期实验制备的USF1 cDNA探针,原位杂交方法检测USF1mRNA的表达和分布.结果:原位杂交染色从钟状晚期小鼠牙胚中开始检测到阳性信号,持续至P11 d,阳性信号主要定位于成牙本质细胞与成釉细胞;而蕾状期,帽状期,钟状期牙胚中未检测到阳性信号,并且在牙齿萌出后(P21 d),牙齿中USF1mRNA阳性信号再次消失.结论:牙胚中有USF1mRNA表达,主要位于分泌期的成牙本质细胞和成釉细胞,表达模式具有显著的时空特异性.
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氯离子通道CLC-3在小鼠牙胚发育中的表达
目的:探讨CLC-3在BALB/c小鼠下颌第一磨牙牙胚不同发育时期的时空表达。方法:选取E13.5、E15.5、E18.5 d的 BALB/c胎鼠和P1、P5 d的BALB/c小鼠,脱颈处死后取其头部,梯度乙醇脱水,石蜡包埋后连续切片,后对石蜡切片行CLC-3免疫组化染色。结果:当胎鼠牙胚处于蕾状期时,CLC-3在牙胚的牙板上皮中可见表达;当牙胚发育为帽状期时,在牙乳头和牙囊细胞中表达;到钟状期时,CLC-3在牙乳头、牙囊、星网状层细胞和中间层细胞中广泛表达。出生后的小鼠CLC-3在牙乳头、牙囊、成釉细胞、成牙本质细胞、星网状层细胞、中间层细胞中均广泛表达。结论:CLC-3在小鼠牙胚发育的不同时期呈现不同的时空表达。
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过量氟对体外培养小鼠磨牙牙胚发育的影响
目的:建立小鼠牙胚发育的体外培养模型,初步研究过量氟对小鼠牙胚发育的影响.方法:取胎龄18 dBALB/c小鼠牙胚,在96孔培养板BGJb半固体培养基标准环境下培养5 d和10 d,HE染色,观察牙胚发育形态,并初步研究5.0×10 g/L氟对体外牙胚发育的影响.结果:牙胚在体外继续发育,牙尖形成明显,内釉上皮细胞和成牙本质细胞极化,分泌基质.氟干预组牙胚发育与对照组相似,但部分区域成牙本质细胞极化不明显,基质分泌明显少于对照组.结论:小鼠牙胚在BGJb半固体培养基生长良好,为研究氟对牙胚损伤提供良好模型.