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前药热化疗对转CD基因结肠癌细胞SW480的作用机制
目的:探讨5-氟胞嘧啶(5-fluorocytosine,5-FC)热化疗对转染组织特异性胞嘧啶脱氨基酶(cytosine deaminase,CD)基因的大肠癌细胞SW480的作用及机制.方法:脂质体法将CEA基因顺式转录调控序列(TRS)驱动CD基因的组织特异性逆转录病毒载体G1CEACDNa转导入大肠癌细胞SW480,以G418筛选阳性克隆扩增后,采用水浴加温法,43℃作用30 min共3次,同时给予前药5-FC进行敏感试验;RT-PCR法检测目的基因的表达,MTT法检测细胞存活率,电镜检测细胞的形态学变化,流式细胞术检测细胞周期变化及凋亡.结果:SW480-CEACD细胞在43℃作用30 min共3次条件下,CD基因能稳定表达;热疗本身对SW480细胞有一定的杀伤作用(P＜0.05),转CD基因后,SW480细胞对5-FC的敏感性明显提高(P＜0.01),热疗与前药5-FC合用,对SW480-CEACD的杀伤作用显著大于对未转基因细胞的杀伤作用(P＜0.01,t=4.356,n=9),亦大于单独应用5-FC时对SW480-CEACD细胞的杀伤作用(P＜0.05,t=2.376,n=9),增加了SW480-CEACD细胞对5-FC的敏感性,电镜及流式细胞术检测显示,细胞死亡以细胞凋亡为主,前药热化疗导致结肠癌细胞SW480产生G1期阻滞,凋亡细胞比例增加.结论:热疗与前药5-FC联合应用,导致结肠癌细胞SW480产生G1期阻滞,细胞凋亡比例增加,提高了CEA组织特异性CD/5-FC系统的靶向性杀伤作用.
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CD/5-FC系统对结肠癌细胞的杀伤作用
目的:探讨组织特异性胞嘧啶脱氨基酶(cytosine deaminase,CD)/5-氟胞嘧啶(5-fluorocytosine,5-FC)系统对不同分泌癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)的大肠癌细胞LoVo和SW480的靶向杀伤作用.方法:脂质体法将CEA基因顺式转录调控序列(TRS)驱动CD基因的组织特异性逆转录病毒载体GICEACDNa及非组织特异性逆转录病毒载体pCD2分别转导入大肠癌细胞LoVo和SW480,以G418筛选阳性克隆扩增后给予前药5-FC进行敏感试验.结果:LoVo-CEACD及LoVo-CD比LoVo对5-FC的敏感性明显提高(P＜0.01,t=5.688,n=9;P＜0.01,t=3.136,n=9),SW480-CEACD及SW480-CD比SW480对5-FC的敏感性明显提高(P＜0.01,t=3.437,n=9;P＜0.01,t=3.516,n=9),LoVo-CEACD比LoVo-CD对5-FC的敏感性明显增强(P＜0.05,t=2.183,n=9),而SW480-CEACD对5-FC的敏感性小于SW480-CD,SW480-CEACD对前药5-FC的敏感性低于LoVo-CEACD(P＜0.05,t=2.504,n=9),转CD基因之LoVo和SW480细胞体外实验均可观察到明显的旁观者效应.结论:组织特异性CD/5-FC系统对LoVo和SW480细胞均有明显的靶向杀伤效果,但对SW480细胞的杀伤作用小于LoVo细胞.
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逆转录病毒介导的CD/5-FC对胰腺癌细胞的杀伤作用
目的:探讨大肠埃希菌胞嘧啶脱氨基酶 (CD)/5-氟胞嘧啶(5-FC)系统对胰腺癌细胞的体外生长抑制作用.方法:将含 CD 基因的重组逆转录病毒载体导入胰腺癌细胞形成转化细胞系,对转化细胞进行体外药物敏感实验,包括:1)转化细胞在前体药物 5-FC 作用下的细胞生长抑制率;2) MTT 法检测旁观者效应.结果:体外实验5-FC的有效浓度＞2 mmol/L时,就表现出杀伤作用,当5-FC的有效浓度＞6 mmol/L时,几乎未见细胞生长,PA317/CD与TD2混育比例在90%时,杀伤作用大,相同药物浓度下,混育96 h杀伤作用明显高于24 h.结论:CD/5-FC 系统对胰腺癌细胞系细胞具有实验性基因治疗作用.
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胞嘧啶脱氨酶对表达不同水平癌胚抗原的大肠癌细胞株的杀伤作用
目的:探讨特异性胞嘧啶脱氨基酶(cytosine deaminase,CD)/5-氟胞嘧啶(5-fluorocytosine,5-FC)系统对表达不同水平癌胚抗原(CEA)的大肠癌细胞株的选择性杀伤作用.方法:用脂质体法将逆转录病毒载体G1CEACDNa和pCD2分别转导入大肠癌LoVo和SW480细胞株.将转染成功pCD2、G1CEACDNa及未转基因之LoVo和SW480细胞分别接种到BALB/c裸鼠皮下.成瘤2周后,每天腹腔注射500mg/kg的5-FC,观察治疗效果.治疗21d后处死动物,肿瘤标本称重后,以RT-PCR法检测目的基因在肿瘤组织中的表达;显微镜下观察肿瘤病理学变化.结果:目的基因在肿瘤组织中获稳定表达.治疗21d后,在LoVo细胞肿瘤中,G1CEACDNa阳性组和pCD2阳性组肿瘤分别重(60.8±15.3)mg和(410.5±56.3)mg,与未转基因组[(3018.5±453.5)mg]比较均有明显差异(P＜0.01,t=4.512;P＜0.01,t=3.320);G1CEACDNa阳性组与pCD2阳性组比较,亦有显著差异(P＜0.05,t=2.375).在SW480肿瘤细胞中,G1CEACDNa阳性组和pCD2基因阳性组肿瘤分别重(356.5±23.5)mg和(463.5±56.9)mg,与对照组[(3263.5±450.6)mg]比较有显著差异(P＜0.01,t=4.547;P＜0.01,t=4.475),但G1CEACDNa阳性组与pCD2基因阳性组之间无明显差异(P>0.05).结论:组织特异性CD/5-FC系统对大肠癌细胞LoVo和SW480均有明显的选择性杀伤作用及抑瘤效应,但其对CEA高表达的LoVo细胞的抗肿瘤作用,高于CEA低表达的SW480细胞.
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组织特异性CD/5-FC系统热化疗对裸鼠结肠癌肝转移的疗效
.结论:组织特异性CD/5-FC系统热化疗对裸鼠结肠癌肝转移瘤有明显的抑制作用.
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前药热化疗对转CD基因结肠癌细胞SW480作用及其机制
有研究表明,癌胚抗原(CEA)转录调控序列可控制胞嘧啶脱氨基酶(CD)基因在CEA阳性的大肠癌组织中高效表达,在前药5-FC作用下产生选择性杀肿瘤细胞作用.研究显示,5-FC热化疗可增加其对转基因细胞的靶向性杀伤作用[1],为探讨前药热化疗作用机制,我们进行了初步研究.
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组织特异性CD/5-FC系统对大肠癌的原位基因治疗
目的探讨癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)组织特异性胞嘧啶脱氨基酶基因对不同分泌CEA大肠癌组织的靶向杀伤作用.方法脂质体法将CEA组织特异性逆转录病毒载体G1CEACDNa在PA317细胞中进行包装,大肠癌细胞LoVo和SW480分别接种到BALB/c裸鼠大腿皮下,成瘤2周后,瘤内多点注射法行原位基因转染,每天腹腔注射500mg/kg的5-FC(5-fluorocytosine),观察治疗效果.结果病毒滴度为5.6×106CFU/L.经多次注射法转染,目的基因在肿瘤组织中能有效表达,治疗21天后,基因治疗组有明显的抑瘤作用,但对LoVo细胞肿瘤的抑瘤作用明显大于对SW480细胞肿瘤.结论 CEA组织特异性CD/5-FC系统对LoVo细胞肿瘤的抑瘤作用更明显.
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CD/5-FC系统抗肿瘤的作用
胞嘧啶脱氨基酶 (cytosine deaminase, CD) / 5-氟胞嘧啶 (5-fluorocytosine, 5- FC)系统是基因介导的酶前药疗法(gene-directed enzyme prodrug therapy,GDEPT)之一,具有选择性和特异性杀伤肿瘤细胞的作用,近年来国内外研究活跃,细胞实验及动物模型研究表明,该系统对全身各系统器官的肿瘤具有不同的作用.
