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丝裂霉素C处理代替γ-辐射在疫苗制备中的应用研究
在自体肿瘤疫苗制备过程中为防止接种部位发生人工种植，需对肿瘤细胞进行灭能处理。常用方法为γ-照射［1］，但所需Gammacell辐射仪价格昂贵，不适于常规应用。为此我们探索用丝裂霉素C（MMC）进行化学处理代替γ-辐射的可行性。材料与方法 一、材料 1. 主要试剂：人肺腺癌细胞系A549人乳腺癌细胞系MCF7购自美国组织细胞库（ATCC），结肠癌细胞来自手术切除新鲜肿瘤组织。〔3H〕-胸腺嘧啶核苷、〔3H〕-尿嘧啶核苷、〔3H〕-混合氨基酸购自中国原子能研究所。MMC为日本KYOWA公司产品。 2. 动物：5周龄雌性裸鼠(购自中国预防医学科学院动物中心)，共6只，实验组对照组各3只。 3. 仪器：1209 RACKBETA液闪仪为瑞士Pharmacia 公司产品。Gammacell-40辐射仪为加拿大MDS Nordion公司产品。 二、方法 1.〔3H〕-掺入：收集5×105细胞，不同剂量MMC处理60min，Hanks液洗涤去除MMC，或60μg/ml MMC处理60min、Hanks液洗涤去除MMC之后加正常培养基，MMC处理后分别于0、1、3、6、12、24h取细胞，加入标记核苷或氨基酸，每孔37k Bq，37℃ 5%的CO2孵育3h，细胞收集器收集细胞于whatman滤纸，分别用双蒸水洗涤2次、5%三氯醋酸固定、75%、100%的酒精脱水、烘干，加液闪液上机检测。 2.γ-照射：收集一定数量的细胞，将细胞置冰浴中，Gammacell辐射仪200Gy照射，照射后分别于0、1、3、6、12、24h取细胞进行〔3H〕-掺入实验。 3.裸鼠荷瘤：收集1×107乳腺癌细胞MCF7，MMC 60μg/ml处理1h，洗涤、离心后于实验组裸鼠腋下接种，对照组未经处理直接接种，2周后观察成瘤情况
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过氧化氢和氨基酸混合液对谷胱甘肽发酵影响的研究
目的 考察过氧化氢和氨基酸混合液前体对突变株YF(ZnCl2r,Eth r)生产谷胱甘肽(GSH)的影响.方法 摇瓶培养,在不同添加时间分别添加不同浓度的过氧化氢和氨基酸混合液前体,测得GSH浓度,细胞干重.结果 发酵9 h时添加12 mmol/L氨基酸混合液,GSH浓度提高了99.6%.而过氧化氢对GSH发酵的影响不大.发酵12 h添加0.3 mmol/LH2O2和18 mmol/L氨基酸混合液,GSH浓度提高了114%.结论 氨基酸混合液能显著促进胞内谷胱甘肽的累积,氨基酸混合液和过氧化氢协同作用可有效的促进胞内谷胱甘肽的累积.
