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靶向bmi-1真核表达载体的构建及对SW480细胞的增殖研究
目的:构建针对原癌基因bmi-1的shRNA逆转录病毒表达载体,检测它对大肠癌细胞株SW480增殖的影响.方法:利用载体介导的RNA干扰技术,设计、合成靶向bmi-1基因、编码短发夹RNA的寡核苷酸序列,并设计无义对照序列,构建重组载体pSIREN-bmi-1及pSIREN-bmi-1-c,载体经脂质体2000介导转染SW480细胞,经MTT检测,观察bmi-1表达受抑后对细胞增殖的影响.结果:成功构建了针对bmi-1基因的shRNA表达载体.结论:针对bmi-1基因的shRNA表达载体能够明显抑制结肠癌细胞SW480的增殖能力.
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奥沙利铂与7-羟基星形孢菌素对结肠癌HCT116细胞的杀伤作用及其机制的研究
目的 奥沙利铂与7-羟基星形孢菌素单独及联合应用,探讨诱导结肠癌细胞HCT116死亡的作用机制.方法应用MTT法检测 L-OHP、UCN-01单药及联用对HCT116细胞的增殖抑制作用;应用流式细胞术、Western blot方法检测药物处理后的结肠癌细胞凋亡情况;应用HE染色法检测丝裂灾变的形态改变.结果 低浓度L-OHP(6.25μmol/L)与UCN-01(100nmol/L)联用对结肠癌HCT116细胞的杀伤可产生协同作用,效果明显强于单独用药组;两药联用AnnexinV阳性细胞率与UCN-01单用无明显差别,但死亡细胞明显增加;两药联用HCT116细胞的形态发生改变,巨核多核细胞较单独用药组增多约10%.结论 L-OHP与UCN-01联用对HCT116细胞具有协同抑制作用,诱导HCT116细胞发生凋亡和丝裂灾变.
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六磷酸肌醇对人结肠腺癌LoVo细胞增殖分化影响
目的观察六磷酸肌醇(IP6)对人结肠腺癌细胞株LoVo体外增殖、分化的影响.方法直接细胞记数法、MTT法、平皿集落形成实验、肠型ALP比活性测定等方法观察LoVo细胞增殖、分化特性.结果与对照组相比,IP6处理组在6h后细胞增殖与集落形成能力呈现抑制状态,并呈时间、剂量依赖关系.分化标志酶ALP比活性增高.结论IP6对LoVo细胞具有细胞毒作用,能明显抑制细胞增殖、诱导细胞分化.
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三氧化二砷在体外抑制结肠癌细胞的研究
目的 在体外观察三氧化二砷(As2O3)对结肠癌细胞系HT-29的抑制作用,并探讨其作用机制,为其是否能作为结肠肿瘤的化疗药物提供理论基础.方法 将不同浓度As2O3作用于HT-29细胞不同时间后,用MTT检测细胞抑制率,光镜及透射电镜观察细胞形态学和超微结构的变化,通过流式细胞仪及共聚焦显微镜分析凋亡及自噬.结果 4.0μmol/L As2O3作用72h可明显抑制HT-29细胞增殖及诱发其凋亡,且抑制率与药物作用时间及浓度成正比.在凋亡早期细胞形态学变化在光镜下可见细胞缩小变圆,在电镜上可见细胞质浓缩、核固缩及自噬溶酶体.4.0μmol/L As2O3作用72h后HT-29细胞凋亡率为25%.结论 As2O3能明显抑制结肠癌细胞系HT-29的增殖,其作用机制与引起凋亡及自噬密切相关.
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肠胃清粗提物协同奥沙利铂抑制人结肠癌HCT116细胞及其作用机制研究
目的 探讨中药复方肠胃清(黄芪、党参、白术、八月札、薏苡仁、野葡萄藤、大血藤、猪苓)粗提物与奥沙利铂联合应用抑制人结肠癌HCTll6细胞的协同增效作用及机理.方法 奥沙利铂、肠胃清提取物分别单独以及联合作用于人结肠癌HCTll6细胞,采用MTT法检测半数抑制质量浓度(IC50),通过TransweⅡ实验检测侵袭转移抑制作用,并利用Western Blotting技术检测侵袭转移与凋亡相关蛋白的表达变化.结果 肠胃清提取物、奥沙利铂以及联合肠胃清提取物(0.15 mg/mL)时奥沙利铂对人结肠癌HCTll6细胞的半数抑制质量浓度分别为(3.24±0.06) mg/mL、(15.74±0.53)μg/mL及(10.32±0.37)μg/mL,联合用药组半数抑制质量浓度降低,侵袭抑制率提高,ADAM-17、MMP-2、MMP-9、BCL-2蛋白表达下调(P<0.05),P53蛋白表达升高(P<0.01).结论 中药复方肠胃清粗提物具有一定的抗人结肠癌细胞HCTll6作用,在与奥沙利铂联用时表现出明显的协同作用,其机制可能与降低ADAM-17、M MP-2、MMP-9、BCL-2蛋白以及提高P53蛋白的表达有关.
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骨桥蛋白促进结肠癌细胞增殖的机制研究
骨桥蛋白(osteopontin,OPN)是一种分泌型非胶原性富含硅铝酸的趋化因子样蛋白,属小整合素结合配体N连接糖蛋白(SIBLING)家族成员,在许多肿瘤中具有重要的致癌作用,其配体是整合素和CD44.我们的研究发现,OPN可以通过和CD44的作用上调结肠癌细胞株HT29内果蝇Zeste基因增强子同源物2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)的表达和其活性,导致组蛋白3第27位赖氨酸三甲基化(H3K27me3)水平增高,对结肠癌细胞具有显著的促增殖作用.通过阻断OPN或利用EZH2特异性抑制剂(GSK126)可以抑制结肠癌细胞的体内外的增殖,从而具有潜在的临床应用价值.
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阿司匹林对结肠癌细胞凋亡及环加氧酶-2基因表达的影响
目的:探讨阿司匹林对结肠癌化学预防的机理.方法:培养结肠癌细胞株Caco-2,用不同浓度阿司匹林进行干预,对细胞增殖、凋亡及环加氧酶-2(COX-2)基因表达进行观察、检测.结果:高浓度阿司匹林组细胞大量死亡,低浓度促进细胞凋亡;与对照组相比,随着阿司匹林浓度增加,COX-2基因表达逐渐减少.结论:低浓度阿司匹林能促进结肠癌细胞凋亡,下调COX-2基因表达.
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非选择性环氧化酶抑制剂诱导结肠癌细胞凋亡的研究
目的:研究非选择性环氧化酶抑制剂舒林酸对结肠癌细胞株HT-29 生长的影响及其参与引起细胞凋亡的可能机制.方法:采用四甲基偶氮唑蓝比色法检测舒林酸对结肠癌细胞增殖的抑制作用,采用激光共聚焦显微镜(LSM)观察细胞凋亡情况,采用流式细胞仪( FCM) 分析其对细胞凋亡及细胞周期的影响.结果:舒林酸能呈剂量和浓度依赖性抑制HT-29的增殖,在4.8 mmol·L-1时其抑制率可达91.8%.AnnexinV/PI染色后LSM观察到凋亡细胞胞膜绿染,胞核红染或呈桔黄色. FCM显示此药能促进细胞的凋亡, 使处于G0 /G1 期的细胞比例显著降低.结论:舒林酸可抑制结肠癌细胞株HT-29生长, 其机制可能与其阻止细胞周期的进展,诱导细胞凋亡有关.
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舒林酸对结肠腺癌HT-29细胞增殖调控的实验研究
目的 观察舒林酸对结肠腺癌HT-29细胞增殖的影响,探讨其作用机制.方法 采用MTT比色法观察舒林酸对HT-29细胞增殖的影响;采用流式细胞仪检测舒林酸对HT-29细胞周期的影响,同时结合DNA电泳和透射电镜观察舒林酸对HT-29细胞有无促凋亡作用.结果 舒林酸可抑制HT-29细胞增殖,使G0/G1期细胞比例增高,S期比例降低,72h后,HT-29细胞凋亡分别上升至12.5%、15.4%和24.2%(P<0.05).上述作用均呈时间和剂量依赖性.结论 舒林酸可抑制HT-29细胞增殖,其机制涉及影响细胞周期和诱导细胞凋亡.
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阿妥伐他汀对结肠癌裸鼠肝转移模型cyr61蛋白表达的影响
大肠癌患者肝转移发生率为50%[1].他汀类药物具有减少心血管急症发生率及抗肿瘤双重作用,我们前期进行了阿妥伐他汀对结肠癌细胞增殖抑制作用的体外研究[2],本实验建立人结肠癌细胞裸鼠肝转移模型,探讨阿妥伐他汀对结肠癌裸鼠肝转移癌生长的影响,为临床应用提供实验基础和理论依据.
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阿妥伐他汀抑制结肠癌细胞增殖作用的研究
结、直肠癌发病率有显著上升趋势.他汀类药物具有减少心血管疾病发生率及抗肿瘤的双重作用,本研究旨在探讨阿妥伐他汀对结肠癌细胞增殖的抑制作用,为阿妥伐他汀的临床应用提供实验基础和理论依据.
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p73对结肠癌细胞侵袭性的影响及其机制研究
p73基因为p53基因家族的新成员,它的某些蛋白与p53具有截然不同的、甚至互相拮抗的生物学功能,使其在肿瘤发生和细胞凋亡研究中成为倍受瞩目的热点[1].本研究首先构建高表达p73的真核表达载体pcDNA3-p73,并将此转染结肠癌细胞HCT-116,检测p73对血管内皮细胞生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和血小板生成素-1(TSP-1)血管因子的调节作用,并观察转染对细胞生长和侵袭性的影响.
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促胃液素对人结肠癌细胞粘着斑激酶酪氨酸磷酸化的影响
促胃液素是一种肽类激素和营养因子.近年来,许多基础和临床研究表明促胃液素能刺激结肠癌细胞生长和增殖[1,2],但对其中信号传导过程未完全明了.本研究试图通过观察促胃液素和其受体结合,对信号分子粘着斑激酶(focal adhension kinase,FAK)酪氨酸磷酸化的影响,进一步了解促胃液素发挥作用的分子机制.
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全反式维甲酸对结肠癌细胞Fas/FasL表达的影响
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丁酸钠对结肠癌细胞小肠三叶肽表达的影响
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外源性脂肪酸对结肠癌细胞的影响
流行病学与实验研究显示,饮食中脂肪酸的含量和种类对结肠癌发生与发展有影响[1].我们通过体外实验观察7种外源性脂肪酸对结肠癌细胞生长的影响,同时观察其对成纤维细胞生长有何影响,并对其可能作用机制进行探讨.
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p27蛋白表达与结肠癌细胞增殖和凋亡的关系
以29例结肠癌标本为研究对象,同时以18例正常结肠及30例溃疡性结肠炎标本为对照。用免疫组化(SABC)法检测其增殖细胞核抗原(PCNA)、p27蛋白的表达,用DNA片段末端标记(TUNEL)法检测其凋亡,探讨p27蛋白这一细胞增殖负调控因子在结肠癌生长机制中的意义[1]。
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泛素特异性蛋白酶15对结肠癌细胞上皮间质转化的影响
目的:研究泛素特异性蛋白酶15(ubiquitin specific peptidase 15,USP15)对结肠癌HCT116细胞上皮间质转化的影响.方法:TGF-β1可诱导结肠癌细胞发生上皮间质转化.采用TGF-β1处理HCT116细胞,同时采用人USP15特异性小干扰RNA (TGF-β1+siUSP15)转染HCT116细胞,阴性对照序列(TGF-β1+siScramble)作为对照.采用siUSP15转染结肠癌奥沙利铂耐药细胞株(HCT 116/L-OHP),然后采用奥沙利铂处理48 h.阴性对照序列(siScramble)作为对照,实时荧光定量聚合酶链反应检测USP15、E钙黏蛋白和波形蛋白mRNA表达.Western印迹检测USP15、E-钙黏蛋白、波形蛋白的蛋白表达.细胞划痕实验检测HCT116的迁移能力.CCK8法检测细胞抑制率.结果:siUSP15能有效抑制USP15在HCT116中的表达.与TGF-β1+siScramble组相比,TGF-β1+siUSP15组细胞中E钙黏蛋白表达上调(P<0.05),而波形蛋白表达下降(P<0.05).细胞划痕实验显示,与TGF-β1+siScramble组相比,TGF-β1+siUSP15细胞的迁移能力显著下降(P<0.05).CCK8检测结果显示,USP15的表达下调能增加HCT116/L-OHP对奥沙利铂的敏感性(P<0.05).结论:USP15在结肠癌细胞上皮间质转化过程中发挥重要作用.
关键词: 泛素特异性蛋白酶15 结肠癌细胞 上皮间质转化 转化生长因子β -
阿司匹林对结直肠癌细胞株细胞凋亡的影响
目的:通过检测阿司匹林对结直肠癌细胞株的影响,以探讨其对结直肠癌化学预防的机制.方法:培养结肠癌细胞株Caco-2,用不同浓度阿司匹林进行干预,并观察、检测其对细胞生长、增殖周期、凋亡及细胞形态的影响.结果:高浓度阿司匹林组细胞大量死亡;低浓度阿司匹林促进细胞凋亡,但不影响细胞增殖周期;随浓度增高,凋亡比率增大.阿司匹林能改变细胞形态及细胞的骨架结构.结论:阿司匹林能抑制结肠癌细胞增殖,促进其凋亡,并改变其骨架结构.
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三氧化二砷诱导的结肠癌细胞凋亡及其与细胞周期的关系
目的:探讨三氧化二砷(As2O3)对结肠癌细胞的凋亡诱导作用及其与细胞周期的关系.方法:采用透射电镜、丫啶橙荧光染色、TdT及流式细胞仪检测药物作用前后细胞在形态学及细胞周期分布等方面的变化.结果:形态学观察发现As2O3诱导的LoVo细胞死亡呈现凋亡特征,研究表明随着药物作用时间延长,凋亡细胞比例逐渐增加.As2O3在低浓度时主要干扰细胞在S期的通过,高浓度时则选择性诱导S期细胞凋亡.结论:As2O3可能是通过诱导细胞凋亡而抑制LoVo细胞增殖,这种杀伤作用存在周期特异性.对此研究有助于治疗方案的合理设计.