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骨桥蛋白促进结肠癌细胞增殖的机制研究
骨桥蛋白(osteopontin,OPN)是一种分泌型非胶原性富含硅铝酸的趋化因子样蛋白,属小整合素结合配体N连接糖蛋白(SIBLING)家族成员,在许多肿瘤中具有重要的致癌作用,其配体是整合素和CD44.我们的研究发现,OPN可以通过和CD44的作用上调结肠癌细胞株HT29内果蝇Zeste基因增强子同源物2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)的表达和其活性,导致组蛋白3第27位赖氨酸三甲基化(H3K27me3)水平增高,对结肠癌细胞具有显著的促增殖作用.通过阻断OPN或利用EZH2特异性抑制剂(GSK126)可以抑制结肠癌细胞的体内外的增殖,从而具有潜在的临床应用价值.
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EZH2抑制剂影响膀胱癌细胞活性及侵袭能力的研究
目的:探讨EZH2抑制剂GSK126对膀胱癌细胞活性及侵袭能力的影响.方法:通过膀胱癌细胞活性实验以及小鼠膀胱癌模型验证GSK126对膀胱癌细胞活性及小鼠膀胱癌肿瘤组织生长的影响,通过RT-PCR和蛋白质印迹法检测膀胱癌细胞上皮间质标记蛋白表达量来验证GSK126 对膀胱癌细胞侵袭能力的影响.结果:细胞活性实验证实GSK126可以有效抑制膀胱癌细胞的活性和小鼠膀胱癌组织的生长.病理检查显示GSK126降低了小鼠膀胱癌组织的侵袭能力.体外实验显示,GSK126升高CDH1、UPK3KA的表达量,降低CDH2、ZEB1的表达量.结论:EZH2抑制剂GSK126在体内及体外实验中可抑制膀胱癌细胞的活性,降低膀胱癌细胞浸润和侵袭能力.
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EZH2抑制剂GSK126对激素性股骨头坏死骨髓间充质干细胞增殖的影响
[目的]研究Zeste基因增强子人类同源2(EZH2)选择性抑制剂GSK126对激素性股骨头坏死患者骨髓间充质干细胞(MSCs)增殖的影响.[方法]选取20例激素性股骨头坏死患者和20例股骨颈骨折患者,无菌条件下抽取患者股骨骨髓,密度梯度离心法体外分离培养MSCs,取第三代细胞实验.实验分为三组:ONFH组为骨坏死患者MSCs,GSK126组为ONFH的MSCs经GSK126干预72h,对照组为股骨颈骨折患者MSCs.MTT检测24、48、72 h三组细胞的增殖能力变化并确定GSK126的适浓度.测定各组细胞内活性氧(ROS)、线粒体膜电位(MMP)的表达水平.实时定量PCR检测PCNA、cyclinD1、cyclinE1表达,Western blot检测H3K27me3的表达.[结果]与对照组相比,ONFH组细胞增殖能力下降、ROS水平增高,MMP下降,差异有统计意义(P＜0.05).10 μmol/LGSK126干预培养72 h后(GSK 126组)能明显促进激素性骨坏死组MSCs增殖,降低ROS水平,提高MMP水平,与ONFH组间的差异有统计学意义(P＜0.05),但仍不及对照组,尽管差异无统计学意义(P＞0.05).实时定量PCR结果显示:ONFH组PCNA、cyclinD1、cyclinE1 mRNA水平明显低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);10 μmol/L GSK126处理后逆转上述mRNA,使其接近对照组水平(P＞0.05).Western blot示ONFH组H3K27me3蛋白水平显著高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05),GSK126处理后蛋白含量明显降低.[结论]H3K27me3修饰异常可能与激素性股骨头坏死的发病相关,10 μmol/L GSK126可逆转其表达,能显著促进MSCs增殖.
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Zeste基因增强子同源物2抑制剂GSK126促进骨髓间充质干细胞成软骨分化
目的 观察Zeste基因增强子同源物2(EZH2)选择性抑制剂GSK126对骨髓间充质干细胞(BMSCs)成软骨分化的影响.方法 体外分离培养BMSCs,取第3代细胞进行实验.噻唑蓝(MTT)检测确定GSK126的适浓度.将细胞消化、悬浮后,以5×106/ml的细胞密度进行高密度培养,用含有或不含GSK126的软骨诱导液诱导培养3周.免疫组织化学、甲苯胺蓝染色检测Ⅱ型胶原、蛋白多糖的表达.实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测Ⅱ型胶原、蛋白多糖和性别决定区Y框蛋白9 (SOX9) mRNA的表达.Westem blot检测H3K27me3的蛋白含量.结果 5μmol/LGSK126无明显细胞毒作用,被选为本实验适浓度.组织学染色显示实验组微团中的细胞体积较对照组稍大,细胞密度稍低.两组微团均有Ⅱ型胶原、蛋白多糖的合成与分泌,且实验组的表达为强烈,实验组Ⅱ型胶原吸光度(A)值为0.3685±0.0405,对照组A值为0.1322±0.021 1.Real-timePCR检测显示,GSK126干预3周后实验组Ⅱ型胶原、蛋白多糖和SOX9基因的表达量明显高于对照组(P＜0.01).Western blot检测显示对照组H3 K27me3蛋白水平显著高于实验组,GSK126的干预使得H3 K27 me3含量明显降低,实验组A值为0.3265 ±0.0302,对照组A值为0.6742±0.0562.结论 GSK126通过降低细胞内H3K27me3蛋白水平,有效地促进BMSCs成软骨方向分化.
