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小柴胡汤及药群配方含药血清对CCl4损伤肝细胞凋亡的影响
目的:探察小柴胡汤含药血清对体外CCl4诱导的肝细胞损伤模型的保护作用.方法:制备小柴胡汤及药群配方的大鼠含药血清,体外10 mmoL/L CCl4诱导肝细胞损伤模型,观察10%药物血清对损伤肝细胞增生率、ALT、细胞形态学以及凋亡率的影响.结果:与正常组比较,模型组肝细胞增生率显著降低(1.22±1.00,1.11±0.09,1.12±0.18,1.10±0.08,vs0.78±0.07,P<0.01),细胞培养上清液中ALT含量显著升高(948±162,748±278,1 081±226,1 148±163,vs 2110±377,P<0.01);与模型组比较,小柴胡汤及其药群配方组的肝细胞增生率显著增高(P<0.01),细胞培养上清液中ALT含量显著降低(P<0.01).倒置显微镜、Giemsa及TUNEL染色观察到,模型组肝细胞存在着明显的坏死和凋亡,小柴胡汤及药群配方的凋亡细胞明显减少.与正常组比较,CCl4模型组细胞凋亡显著增高(2.9 467±1.0 007 vs16.3 175±4.5 358,P<0.01);与模型组比较,小柴胡汤及药群配方组的细胞凋亡率显著降低(4.2 117±2.3 733,6.4800±2.4052,5.6 200±2.0 573,4.6440±0.8825,vs 16.3 175±4.5 358,P<0.01).结论:CCl4引起的肝损伤同时存在着明显的凋亡和坏死,小柴胡汤及药群配方含药血清对体外CCl4诱导的肝细胞损伤有保护作用.
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结肠癌LS174细胞培养上清对树突状细胞诱导CTL杀伤效应的影响
目的:观察结肠癌细胞对人单个核细胞源树突状细胞(DC)诱导的CTL杀伤效应的影响,探讨其在人体的免疫逃避机制.方法:人外周血分离单个核细胞以GM-CSF和IL-4培养DC,用结肠癌LS174细胞的提取物诱导DC,并激活T淋巴细胞抗肿瘤效应,在此不同过程中,体系中加入人结肠癌细胞系LS174的培养上清液.以正常培养体系为对照,通过计算细胞毒杀伤率检测不同条件下DC激活同种异体T淋巴细胞杀伤肿瘤细胞的能力.结果:LS174细胞培养上清液作为条件培养的DC,在DC培养的早期阶段对DC激活过程有明显的影响(在DC培养的第1 d加入肿瘤培养上清组,第3 d加入肿瘤培养上清组vs正常培养的DC组,DC培养第5 d加入肿瘤培养上清组,DC激活T淋巴细胞过程加入肿瘤培养上清组,P<0.05).结论:肿瘤细胞分泌的某些物质可在DC培养的早期阶段影响肿瘤的免疫,这可能是肿瘤细胞逃避机体免疫监视的机制之一.
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子宫内膜异位症患者腹腔液中血管内皮生长因子和干扰素α水平的测定
血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)是巨噬细胞分泌的主要血管生成因子之一[1].VEGF在子宫内膜异位症(内异症)发病过程中起重要作用,同时巨噬细胞还可以分泌具有血管生成抑制作用的因子--干扰素α[2](IFN-α).本研究测定了内异症患者和非内异症妇女腹腔液巨噬细胞培养上清液中VEGF、IFN-α的水平,并探讨其在内异症发病中的作用.
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卵巢上皮性癌细胞培养上清液增强CD+4CD+25调节性T淋巴细胞增殖及免疫抑制功能的实验研究
CD+4CD+25调节性T淋巴细胞是一类具有抑制CD4+和CD8+T淋巴细胞活化和增殖功能的免疫调节细胞.近的研究发现,在卵巢上皮性癌(卵巢癌)患者外周血及腹腔内,这类细胞的比例显著增加,可能是卵巢癌患者免疫功能下降和生存率低下的重要原因之一[1].我们先前的体外实验也证实,卵巢癌细胞株SKOV3的培养上清液和健康人外周血淋巴细胞共培养后,能诱导其中的CD+4CD+25调节性T淋巴细胞比例增加[2].为了进一步阐明其机制,我们将卵巢癌细胞培养上清液和纯化的CD+4CD+25调节性T淋巴细胞共同培养,观察其增殖、表型及功能是否发生改变.
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克隆测序鉴定柯萨奇病毒B3m诱导BALB/c小鼠急性心肌炎模型
小儿病毒性心肌炎发病率的逐年增高,越来越受到专家学者的关注.关于病毒性心肌炎的发病机制及药物防治等基础性与应用性研究都需要一个可靠而稳定的动物模型[1].我们以质粒克隆测定BALB/c心肌炎模型小鼠的心肌组织中CVB3m序列,对测序结果与已知CVB3m cDNA全序列进行了比较,并配合病理观察,鉴定小鼠心肌炎模型.材料与方法1. 材料:(1)病毒:CVB3m(上海第二军医大学沈茜教授惠赠),Hela细胞传代,TCID50为3.67×10-4.(2)动物:70只BALB/c小鼠,5~6周龄,雄性,体重18 g左右(中国医科大学动物中心提供,SPF级).(3)仪器:DNA测序仪(ABI PRISMTM 377X)、蛋白核酸分析仪(美国Beckman DU-600)、PCR仪(美国PE-9600),倒置显微镜(德国LEICA)、超薄切片机(LKB-V)、电子显微镜(日本HITACHI H-600)、低温高速离心机(德国Heraeus Biofuge 28RS)、电泳仪(上海天能EPS-300);CMIAS医学图像分析管理系统、天能凝胶分析系统.(4)试剂:TRIZOL总RNA提取试剂(GIBCO公司)、RT-PCR试剂盒(大连宝生物工程有限公司)、AmpliTaq DNA聚合酶循环反应试剂盒(PE公司).(5)引物:CVB3m特异引物为软件设计所得,CVB3m上游引物(2458-2476)为 5'- GTG GAA GAC GCG ATA ACA - 3',下游引物(3286-3269)为5'- CAT TGT AGT GAT GCT TTG - 3',扩增片段计828 bp;测序用引物F(M13-47)与引物R(RV-M),分别为 5'- CGC CAG GGT TTT CCC AGT CAC GAC- 3'与5'- GAG CGG ATA ACA ATT TCA CAC AGG - 3'.引物由宝生物工程(大连)有限公司合成.2.实验方法:(1)分组与小鼠CVB3m急性心肌炎模型的建立:70只小鼠按体重随机分为对照组(A组)与模型组(B组).B组经腹腔注射接种0.2 ml含TCID50的CVB3m.A组予以等量不含病毒的Hela 细胞培养上清液.(2)取材:各组分别于感染后3、5、7、10、14 d随机活杀6只鼠,取心肌组织,分别用于克隆测序及病理组织学检查.(3) RT-PCR:①提取总RNA:取心肌组织加TROZOL制成匀浆,经超声破碎、提取,氯仿、异丙醇等分离、沉淀,后用适量的无RNase水溶解RNA沉淀.②合成 cDNA:将总RNA 反转录合成第一条cDNA .条件:65℃ 1 min、30 ℃ 5 min、15~30 min内匀速升温至 65 ℃、65 ℃ 15~30 min、98 ℃ 5 min、5 ℃ 5 min.③PCR扩增:将反转录的cDNA进一步扩增,扩增参数:94℃ 3 min,94 ℃ 30 s、56 ℃ 30 s、72℃ 1 min,30个循环后72 ℃ 5 min.④产物测定:选取模型组CVB3m引物RT-PCR扩增产物,再次扩增,以蛋白核酸分析仪测吸光度A值(曾称光密度)并计算DNA产量.⑤ RT-PCR产物检测: 5 V/cm电压电泳45 min,确定目标DNA,以天能凝胶分析系统拍摄、分析.(4) RT-PCR扩增产物克隆与测定序列:①回收目的DNA:切取目的DNA片段,加入Nacl溶液,加热融化,缓冲液反复洗,离心,回收上清液即得.②连接与转化:将DNA、载体(pMD18)及连接酶混匀, 16℃恒温1 h;与JM109感受态细胞冰浴1 h;加葡萄糖和SOB,37 ℃摇床1 h;取20 μl涂平板,培养过夜.③质粒扩增与纯化:将培养的质粒再次扩增,并用碱裂解法提取质粒,限制性内切酶切割,得到纯化的质粒.(5)序列测定与比较:应用DNA测序仪测定克隆序列,将测定序列结果与已知CVB3m cDNA全序列比较[2].
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口腔癌细胞HSV-tk基因的转导及其鉴定
单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(herpes simplex virus thymidine kinase, HSV-tk)是自杀基因的代表。我们将HSV-tk基因转导入口腔癌细胞系Tca8113和ACC-M细胞并对基因转导细胞进行鉴定,以便为体内外及临床前期试验打下基础。 材料与方法:①人舌鳞状细胞癌细胞系Tca8113和人高转移性涎腺腺样囊性癌细胞株ACC-M由上海第二医科大学口腔医学院口腔颌面外科建立[1,2]。逆转录病毒包装细胞PA317细胞、NIH3T3细胞由上海第二医科大学人类基因治疗中心保存。含HSV-tk基因的逆转录病毒载体pL(TK)SN由上海第二医科大学人类基因治疗中心构建。②脂质体介导基因转移: PA317细胞中加入DNA与脂质体混合物1 ml,6 h后,以400 mg/L G418筛选至克隆出现并扩增,命名为PA317TK细胞和PA317LN细胞。③逆转录病毒载体上清液的收集及滴度测定: 收集PA317TK和PA317LN细胞培养上清液。NIH3T3细胞中加入8 mg/L的polybrene和适量病毒悬液,8 h后以G418筛选至克隆出现。根据克隆形成数计算病毒滴度。④肿瘤细胞tk基因的转导:肿瘤细胞中加入polybrene和适量病毒上清液,24 h后,以G418筛选至克隆出现并扩增。⑤PCR鉴定外源基因整合: 细胞总DNA进行PCR:NeoR基因5′端引物为5′-CAAGATGGATTGCACGCAGG-3′,3′端引物为5′-CCCGCTCAGAAAGAACTCGTC-3′。⑥RT-PCR检测外源基因表达 TRIzol RNA抽提试剂盒抽提细胞RNA并进行RT-PCR,产物做PCR,β-actin作内参照。⑦安全性检测: 1 μg细胞DNA进行PCR:env基因5′端引物为5′-ACCTGGAGAGTCACCAACC-3′,3′端引物为5′-TACTTTGGAGAG GTCGTAGC-3′。
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Kupffer细胞培养上清液对辐射小鼠粒-单系血细胞发生的影响
Kupffer细胞为机体内重要免疫活性细胞,尤其在吞噬清除胃肠道进入门静脉的细菌和异物方面起关键性作用[1].它来源于血液中的单核细胞,是单核吞噬细胞系统家族中的重要成员,占其总量的近50%.我们的研究发现Kupffer细胞除具有以上功能外,尚能通过释放某些活性物质反过来影响其起源细胞的发生过程.现将结果报道于下.
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血管内皮细胞生长因子及其受体研究进展
1983年Senger等[1]发现用癌性腹水作Mile试验,可使豚鼠皮肤对美兰的通透性增加.并且在癌性腹水和肿瘤细胞培养上清液中分离、纯化出可使微血管与小静脉血管通透性增加的活性物质,称作血管通透因子(Vascular Permeability Factor,VPF)[1,2].后来发现该因子特异性作用于血管内皮细胞,并促进血管内皮细胞的增殖,因此又称血管内皮细胞生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF).实验和临床研究发现,实体肿瘤在血管未形成时,肿瘤的增殖、生长有限,几乎不发生肿瘤转移.肿瘤诱发宿主微血管内皮细胞增殖,形成微血管时肿瘤细胞迅速增加,肿瘤体积增大,并且具有潜在转移倾向.因此,VEGF与肿瘤生长和转移的关系越来越受到关注.本文就VEGF的理化性质、生物学功能的研究近况简要概述.
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巨噬细胞炎症蛋白1α对多发性骨髓瘤细胞增殖与迁移能力的影响
我们通过检测多发性骨髓瘤(MM)患者骨髓及KM3细胞培养上清液中巨噬细胞炎症蛋白1α(MIP-1α)水平,体外运用细胞培养技术分析瘤细胞在MIP-1α作用下的增殖、迁移作用,从而探讨MIP-1α对瘤细胞增殖与迁移能力的影响.
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转化生长因子-β与狼疮肾炎
1978年,Deleno和Todaeo在被moloney肿瘤病毒转化的小鼠3T3细胞培养上清液中发现一种称为肉瘤生长因子(sarcoma growth factor,SGF)的多肽,后来在其他肿瘤细胞的酸乙醇提取液中也发现有同样的活性物,更名为转化生长因子(transforming growth factor,TGF).该生长因子有α、β两种类型.目前对TGF-β的研究较多,它是一大类多效能细胞因子,有多种同源异构体,具有调节细胞生长、诱导细胞外基质(extracellular matrix,ECM)分泌及调节炎症、免疫等的功能,在某些与慢性增生硬化有关的疾病如狼疮肾炎(lupus nephritis,LN)中起着重要的作用.本文拟对TGF-β的生成、结构、生物学特性及其在LN中的作用进行综述.
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骨髓间充质干细胞在多发性骨髓瘤活动与缓解期具有不同的促血管生成能力
背景:活动期和缓解期多发性骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞的血管生成能力有无差异目前尚不清楚。目的:观察多发性骨髓瘤活动期及缓解期骨髓间充质干细胞促血管生成能力的差异。方法:抽取13例多发性骨髓瘤患者治疗前和4个周期治疗后的骨髓,分离培养出骨髓间充质干细胞,采用ELISA 方法测定骨髓间充质干细胞培养上清液中血管内皮生长因子、肝细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子的浓度;MTT检测骨髓间充质干细胞培养上清液对脐静脉内皮细胞增殖能力的影响;通过Transwel 小室观察骨髓间充质干细胞培养上清液对脐静脉内皮细胞运动能力的影响;通过人工基底膜实验观察骨髓间充质干细胞体外促血管生成和成管能力。结果与结论:活动期多发性骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞培养上清中血管内皮生长因子、肝细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子浓度明显高于缓解期(P<0.05);骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞上清对脐静脉内皮细胞增殖作用呈剂量依赖性,活动期明显强于缓解期(P<0.05);活动期骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞上清对脐静脉内皮细胞迁移作用明显高于缓解期(P<0.05);骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞体外具有明显成血管作用,活动期明显强于缓解期(P<0.05)。结果提示多发性骨髓瘤活动期骨髓间充质干细胞促血管生成能力明显大于缓解期。
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病毒拮抗干扰素的作用
1957年,英国细菌学家Alick lsaacs与瑞士微生物学家Jean Lindenmann将经热灭活(后来用紫外灭活)的流感病毒处理鸡胚尿囊绒毛膜,再用活的流感病毒攻击,发现绒毛膜不能被活病毒感染,进一步从细胞培养上清液中提纯了一种蛋白质,将此蛋白加入新鲜的绒毛膜后同样呈现拮抗病毒感染的现象,他们将此现象称为"干扰(interference)",将此蛋白则称为"干扰素(interferon)"[1],由此拉开了干扰素时代的序幕.
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人早孕期滋养细胞通过表达趋化因子SDF-1募集蜕膜免疫活性细胞(摘要)
目的研究人早孕期绒毛及滋养细胞趋化因子SDF-1的表达、分泌及其对蜕膜免疫活性细胞的募集作用.方法收集早孕期绒毛组织并检测SDF-1的定位表达;用ELISA分析早孕期滋养细胞培养上清液中SDF-1的浓度水平;分离早孕期蜕膜免疫活性细胞,以趋化试验研究SDF-1及滋养细胞培养上清液对蜕膜免疫活性细胞的趋化作用.结果人早孕期滋养细胞表达并分泌SDF-1;一定浓度范围的SDF-l对蜕膜免疫活性细胞具有趋化作用,大趋化指数为3.27±0.89;滋养细胞培养上清液也明显趋化蜕膜免疫活性细胞,趋化指数为2.11±0.79.结论人早孕期滋养细胞表达的SDF-1对蜕膜免疫活性细胞具有趋化、募集作用,从而有助于形成蜕膜独特的淋巴细胞群体并维持母-胎免疫耐受.
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角膜缘干细胞培养液影响血管内皮细胞增殖的实验研究
本研究通过体外细胞培养的方法观察角膜缘干细胞培养上清液对人脐静脉血管内皮细胞增殖的影响.
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008 抗氧化剂和NFκB对大鼠肺微血管内皮细胞iNOS表达的影响
目的: 探讨NFκB以及抗氧化剂在大鼠肺微血管内皮细胞中对TNF-α加LPS诱导的iNOS基因表达的作用及其机制. 方法: 通过免疫组化染色ABC法用抗内皮细胞抗体CD31对培养的大鼠肺微血管内皮细胞进行鉴定. Griess法测定细胞培养上清液中的亚硝酸盐浓度以反映NO的生成. Northernblot结合RT-PCR分析iNOS mRNA水平. EMSA法测定细胞核内NFκB的结合活性. 结果: TNFα(100 U/ml)加LPS(1 ug/ml)处理内皮细胞2 h后iNOS mRNA水平明显上升(P<0.05), 24 h后能明显增加NO的生成(P<0.01). 用放线菌酮(10 mg/ml)或抗氧化剂吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(pyrrolidine dithiocarbamate, PDTC, 0.1 mmol/L)或氮乙酰基半胱氨酸(N-acetylcystenine, NAC, 20 mmol/L)处理内皮细胞能降低TNF-α和LPS诱导的亚硝酸盐(NO)生成和iNOS mRNA表达(P<0.05). 抗氧化剂PDTC和NAC对NO诱导生成的抑制作用呈现剂量-效应关系. TNF-α(100 U/ml)加LPS(1 μg/ml)能刺激内皮细胞中NFκB的激活和转位. 当内皮细胞培养体系中加入PDTC(0.1 mmol/L)或NAC(20 mmol/L)1.5 h后这种激活作用被阻滞. 结论: ① TNF-α加LPS能够在转录或转录后水平诱导iNOS基因表达. ② TNF-α加LPS诱导的iNOS基因表达依赖于NFκB的激活. ③抗氧化剂能够通过抑制NFκB的激活来抑制iNOS基因的诱导表达.
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内皮素抑制剂及其受体拮抗剂的研究进展
蛛网膜下腔出血引起迟发血管痉挛是动脉瘤病人死亡和致残的重要原因.已证明迟发颅内血管痉挛的发生机制与许多病理改变有关.这些病理改变包括血管内皮损伤、血管反应性改变、血管壁炎性或免疫性反应及蛛网膜下腔内血块产生致痉挛物质引起的平滑肌细胞收缩, 其中内皮素(Endothelin, ET)在颅内血管紧张度的调节中起重要作用[1].ET是1988年Yanagisawa等从猪的主动脉内皮细胞培养上清液中分离纯化出的一种含21个氨基酸的血管活性肽, 是目前所知作用强的长效血管收缩剂[2].ET家族中有三种异构肽: 即ET-1、 ET-2和ET-3, 其中ET-1对颅内血管作用强.ET家族有三种不同受体, 即分布于血管平滑肌细胞的ETA受体, 分布于血管内皮细胞的ETB1受体, 分布于平滑肌细胞的ETB2受体.近年来, 人们发现了多种内皮素抑制剂及其受体拮抗剂, 对蛛网膜下腔出血引起的迟发血管痉挛有显著的预防和治疗作用.
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测定细胞培养上清液中亚硝酸盐的荧光分光光度法
目的:建立检测细胞培养上清液中亚硝酸盐的方法.方法:以2,3-二氨基萘与亚硝酸盐反应生成荧光产物2,3-二氨基萘三唑或1-[H]-萘三唑,用荧光分光光度法测定.结果:2,3-二氨基萘浓度为0.63 mmol*L-1,反应液和终止反应后pH值各为2.00和12.10,20℃水浴15 min是较适测定条件.本法的检出限为61.34 nmol*L-1,日内和日间变异系数分别小于3%和5%,加入NaNO2 0.36、1.45、2.54 nmol的回收率各为99.12%±4.64%、103.28%±2.68%、105.14%±4.36%.测定大鼠腹腔巨噬细胞、大鼠胎鼠大脑半球神经细胞培养上清液亚硝酸盐含量分别为(109.95±4.57)μmol*L-1和(6.52±1.57)μmol*L-1,后者的95%分布范围为3.44-9.60 μmol*L-1.核磁共振氢谱显示标准品化学位移δ7.33027 ppm和细胞培养上清液化学位移δ7.33023 ppm.结论:本法特异、敏感、快速、简便,对一氧化氮的研究有一定价值.
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白细胞介素-2的研究进展
白细胞介素-2(Interleukin-2,IL-2)是中国第一个用基因工程生产而获得高利润的蛋白质药物.1976年Morgan等发现小鼠脾细胞培养上清液中有一种能够促进和维持T细胞在体外长期生长的因子,将其称为T细胞生长因子(T cellgrowth factor,TCGF),1979年统一命名为IL-2.1980年Rosenberg发现IL-2在体外能诱导广谱抗肿瘤作用的LAK细胞增殖,并开始把IL-2和LAK细胞联合应用治疗晚期肿瘤病人,取得了一定疗效,自此激发了人们对于IL-2生物学功能及其临床应用研究的浓厚兴趣,LAK全国销售额当时有几十亿元.近年来,人们对IL-2结构与功能有了更加深入的认识,同时也逐渐发现了IL-2许多新的临床作用,下面就IL-2的研究进展和市场情况作简要介绍.
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柴胡解毒汤在体外细胞培养中抗HBV活性的研究
我国有数千年应用中医药治疗疾病的传统和经验,从中已发现不少抗乙型肝炎、爱滋病、出血热、疱疹、柯萨奇等病毒有效单方和复方制剂,有的已在临床上用于治疗病毒性疾病.自从Sells等建立HBV-DNA转染细胞株2.2.15,为体外筛选抗病毒药物提供了模型.为了找出更有效的抗HBV天然药物,我们通过ELISA法检测细胞培养上清液中HBsAg和HBeAg的分泌情况,对不同浓缩倍数的柴胡解毒汤进行了抗HBV作用的评价.同时,应用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色分析法检测药物的细胞毒性,以观察药物的临床实用价值.
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两种中药多糖诱导人内皮细胞表达造血生长因子的实验研究
血管内皮细胞(EC)是造血诱导微环境的重要组成成分.文献报道EC能分泌多种造血生长因子来调控造血.人参与当归是祖国传统医学的"补气"和"补血"要药,人参多糖(G PS)和当归多糖(APS)为其主要药物成分之一.近10年来我们课题组对APS以及G PS促进血细胞生成的调控机理进行了系统的研究,我们既往研究证明:APS对造血干/ 祖细胞增殖分化有显著刺激作用,GPS也可促进人粒单系造血祖细胞的增殖和分化,但其现代生物学机理尚不甚清楚.本研究采用造血生长因子生物活性检测与免疫细胞化学等技术 ,探讨APS和GPS诱导人内皮细胞表达GM-CSF、IL-3、IL-6与促进人造血祖细胞增殖分化的相互关系.材料与方法:(1)GPS:重庆中药研究所分离、提取、纯化,纯度>90%;APS:兰州医学院血液病研究所惠赠,纯度>85%.(2)人脐静脉内皮细胞株(Ecv304).(3)EC培养上清液的制备:分别制备对照组(不加任何刺激物,常规培养)、IL-1、GPS与APS体外诱导组(IL-1:100u/ml ,GPS:50μg/ml,APS:200μg/ml)的Ecv304细胞培养上清液 .(4)造血生长因子活性检测:以每种植5×104个骨髓有核细胞所生成的CFU-M ix、CFU-GM集落数评价各种Ecv304细胞培养上清液中造血生长因子的活性. (5)SP免疫细胞化学检测经IL-1、GPS和APS诱导和对照组Ecv304细胞的G M-CSF、IL-3、IL-6蛋白表达.实验结果表明:(1)经IL-1或GPS、A PS诱导制备的Ecv304细胞培养上清液能显著促进CFU-Mix、CFU-GM的增殖,其集落产率与对照组相比有显著的统计学意义(CFU-Mix:GPS组:52. 89±9.67,APS组:54.33±10.39,IL-1组:61.13±9.2 6,对照组:36.24±10.74;CFU-GM:GPS组:40.36±8.92 ,APS组:44.17±9.53,IL-1组:43.37±8.56,对照组:30 .78±11.45).(2)免疫细胞化学检测显示正常静止状态下EC胞浆内有棕黄色的 GM-CSF、IL-3、IL-6蛋白表达的阳性颗粒,但表达阳性率及强度均很低,经过IL-1或GPS、APS诱导后Ecv304细胞的GM-CSF、IL-3、IL- 6蛋白表达阳性细胞率和表达强度均明显提高.结果表明:经GPS、APS或IL-1诱导制备的内皮细胞培养上清液对CFU-GM和CFU-Mix的增殖分化有明显促进作用 ,提示其中造血生长因子(HGF)含量或活性有所增加.我们推测GPS和APS对内皮细胞表达HGF具有明显的刺激作用.现代研究认为:HGF与造血细胞膜上相应的HGF 受体结合,启动调控信号向核内转导,引起核内某些基因转录增强或其他基因转录抑制,终表现出蛋白合成改变,而导致细胞行为等变化.可见研究HGF的蛋白表达及调控能深入阐明造血调控的分子生物学机理.HGF生物学活性检测仅反映了内皮细胞条件培养液所含 HGF的生物学活性,HGF有其多效性和丰富性的特点,为进一步阐明GPS和APS能诱导和影响哪些HGF表达,本研究采用免疫细胞化学SP法对内皮细胞的GM-CSF、 IL-3和IL-6蛋白表达进行检测,结果表明:IL-1或GPS、APS诱导后内皮细胞的GM-CSF、IL-3和IL-6蛋白表达阳性率和强度积分值均显著高于对照组 ,这与生物学活性检测的结果相吻合.我们研究结果提示:GPS和APS调控造血的机理之一是上调造血微环境中的内皮细胞分泌造血调控因子来调节血细胞的生成.这或许是人参和当归"补气""补血"的现代生物学机理之一.