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目标区域测序诊断CRB1突变导致的视网膜变性
目的 研究一例疑是视网膜变性的患儿,进行基因检测并作出明确的基因诊断.方法 常规检查患儿和家属的眼睛,特别是视网膜的情况.收集患者及家庭成员的外周静脉血液,提取基因组DNA.通过目标区域外显子组序列捕获联合新一代测序(简称目标区域测序),利用生物信息学分析筛选出一系列可能的突变,再通过Sanger测序和共分离研究进行验证,从而确定先证者的致病突变.后,通过PCR和Sanger测序检测突变基因.结果 患儿视力障碍严重,眼底检查所见符合视网膜变性.其他人眼睛正常.基因诊断结果表明,先证者携带CRB1基因的复合杂合性致病突变(c.3521G＞C和c.1141 _1142 insTGGCT).这两个突变分别来源于父亲(c.3521G＞C,p.C1174S)和母亲(c.1141_1142insTGGGCT),为隐性遗传.患儿的弟弟(新生儿)只有一个c.1141_1142 insTGGCT突变,表明他不会发病.建议新生儿长大后在生育前要进行遗传检查和咨询.结论 目标区域测序的基因诊断方法是检测视网膜变性疾病突变基因的强大工具,有利于对患者做出早期、明确、分子水平的诊断,在特定疾病的理解、预防和预后判定方面能发挥重要作用.同时为其尚无法做临床检查和诊断的新生儿弟弟进行了基因诊断,通过预测,排除了发病的可能.
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一个汉族Leber先天性黑矇家系CRB1基因的复合杂合突变的全外显子组测序
目的 鉴定一个汉族Leber先天性黑矇(LCA)家系的致病突变基因.方法 2011年8月在汕头国际眼科中心收集一个中国潮汕地区汉族LCA家系,对家系成员进行病史采集,绘制家系图,测定佳矫正视力并行眼压测量和眼底检查.采集家系成员的外周静脉血5 ml,提取DNA,对先证者进行全外显子组测序,对测序结果进行逐步筛选,在家系内进行Sanger测序验证. 结果 该家系共3代11名成员,Ⅱ2和Ⅱ4为LCA患者,为同胞姐妹,患者父母(Ⅰ-1和Ⅰ-2)及患者子女(Ⅲ-1,Ⅲ-2,Ⅲ-3和Ⅲ-4)表型均正常,符合常染色体隐性遗传模式特征.患者均为幼年期发病,视力分别是手动和光感,视网膜呈椒盐状色素沉着.先证者外显子组测序逐步筛选结果显示,在CRB1基因上存在2个复合杂合突变位点,即c.2234C＞T,p.T745M和c.3488G＞T,p.C1163F.Sanger测序验证后证实,2例患者(Ⅱ-2和Ⅲ-4)均携带该2个复合杂合突变.父亲和母亲分别携带其中1个突变,其他3名表型正常家系成员携带其中1个突变或者2个突变均为阴性. 结论 本研究采用全外显子组测序的方法在一个中国汉族LCA家系中鉴定出CRB1基因的2个复合杂合突变.
关键词： Leber先天性黑矇 全外显子组测序 复合杂合突变 CRB1基因 家系
