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MyoD基因诱导大鼠成纤维细胞转化为成肌细胞的研究
目的 探讨MyoD在体外诱导大鼠成纤维细胞分化为成肌细胞中的作用.方法 将大鼠成纤维细胞分成2组:未转染组(N组)和MyoD基因转染组(M组);利用慢病毒表达系统,将大鼠MyoD基因转入大鼠成纤维细胞中,Blasticidin筛选;用RT-PCR和Western blot检测MyoD的表达;免疫组织化学检测MyoD、desmin及α-actin的表达;电子显微镜观察转染前后细胞形态的变化.结果 RT-PCR和Western blot可检测出MyoD基因转染后细胞表达MyoD mRNA及蛋白质;免疫细胞化学检测MyoD表达在基因转染的细胞中为阳性,desmin、α-actin阳性表达只出现在M组;电子显微镜观察转染后的细胞胞浆中有微丝以及微管等结构.结论 MyoD基因可诱导大鼠成纤维细胞分化成的细胞具有成肌细胞特征,为进一步研究MyoD基因诱导的成肌细胞及在大鼠心梗损伤修复中的作用提供了实验基础.
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TGF-β1介导 NF-κB 信号通路抑制横纹肌肉瘤的肌分化
目的：探讨 TGF-β1介导 NF-κB 信号通路抑制横纹肌肉瘤肌分化的分子机制。方法：将构建的 TGF-β1 siR-NA 质粒表达系统转染横纹肌肉瘤 RD 细胞株，通过免疫荧光染色法检测 Caspase-3的表达；TUNEL 试剂盒检测 RD 细胞的凋亡；透射电镜检测 RD 细胞的分化情况；细胞免疫荧光法检测外源性 TGF-β1对 RD 细胞中 NF-κB 家族成员p65、p50、p52和 RelB 表达水平的影响；免疫组化 S-P 法分别检测横纹肌肉瘤石蜡组织中 NF-κB 家族成员的表达水平。结果：与对照组比较，TGF-β1沉默 RD 细胞中 Caspase3的表达和 TUNEL 法检测的阳性细胞数量明显增加（P ＜0．05）；电镜结果显示肌丝结构明显增加；在外源性 TGF-β1（2 ng／mL）作用6 h 后，RD 中 p65、p50的阳性率和阳性强度均明显高于对照组（P ＜0．05）；p65、p50的表达率在 TGF-β1高表达横纹肌肉瘤石蜡组织中明显高于 TGF-β1低表达组（P ＜0．05）。结论：横纹肌肉瘤的分化抑制可能与 TGF-β1介导的 NF-κB 家族成员 p65、p50上调有关。
