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叶酸挽救乙醇致斑马鱼胚胎心脏和流出道发育异常
目的 观察乙醇对斑马鱼胚胎心脏和流出道发育的干扰作用,并初步探讨叶酸挽救乙醇所致心脏和流出道发育异常的佳时段和可能机制.方法在斑马鱼胚胎发育不同时段予以乙醇处理,观察胚胎的发育异常情况.将受精后7～12 h被予以乙醇组定义为乙醇处理组.在乙醇处理组胚胎的发育不同时段给予外源性叶酸进行叶酸挽救实验,观察各叶酸干预组胚胎的发育状况,探寻叶酸挽救的佳时段.将受精后7～12 h给予叶酸组定义为叶酸挽救组.观察并统计乙醇处理组以及叶酸挽救组的胚胎发育异常百分比、存活百分比、心脏和流出道形态及其异常百分比、心率、心室收缩指数等指标来评估胚胎的发育状况.利用荧光显微造影的方法探查心脏流出道形态,采用胚胎整体原位杂交和Real-time PCR方法检测胚胎bmp2b、tbx1的表达情况.结果乙醇可干扰胚胎发育,乙醇处理组胚胎存在明显心脏和流出道形态异常以及心功能损害,在胚胎发育早期乙醇的干扰作用明显.给予外源性叶酸能挽救乙醇导致的胚胎发育异常,在胚胎受精后7～12 h叶酸挽救作用显著.乙醇处理组胚胎心脏和流出道的bmp2b、tb1表达下降;予以叶酸干预后,乙醇处理组胚胎bmp2b和tbx1表达水平上调.结论 叶酸能有效挽救乙醇导致的心脏和流出道发育异常,其机制可能是上调乙醇处理组胚胎bmp2b、tbx1的表达水平.
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叶酸拮抗剂甲氨喋呤导致斑马鱼心脏发育异常及BMP2b HAS2 表达下调
目的 该研究利用叶酸拮抗剂甲氨喋呤(MTX)构建叶酸生物学活性受抑制的斑马鱼模型后,观察叶酸生物学活性受抑后对斑马鱼心脏发育的干扰作用以及对斑马鱼心脏发育相关基因BMP2b及HAS2表达的影响.方法 用不同浓度的MTX处理不同发育时段的斑马鱼胚胎,于48 hpf(hours post fertilization)观察胚胎心脏发育情况并计数各组心脏发育异常个体的百分比及心率,评定MTX对斑马鱼心脏发育的影响程度.用1.5×10-3M的MTX处理6～10 hpf发育时段的斑马鱼胚胎作为MTX处理组.于24 hpf及48 hpf在显微镜下观察MTX处理组斑马鱼胚胎心脏发育情况.借助胚胎整体原位杂交和Real-time PCR的方法检测BMP2b和HAS2在正常对照组及MTX处理组胚胎的表达水平.结果 胚胎早期发育阶段6～12hpf是斑马鱼胚胎对MTX的敏感时期.显微镜下观察结果显示MTX处理组斑马鱼心脏发育延迟,并有心脏形态发育明显异常.胚胎整体原位杂交结果显示MTX处理组斑马鱼心脏发育相关基因BMP2b及HAS2在心脏的表达于36 hpf及48 hpf下调.Real-time PCR结果显示MTX处理组斑马鱼BMP2b的相对表达量在12,24,36及48 hpf减少,HAS2的相对表达量在24,36及48 hpf减少.结论 叶酸生物学活性受抑对早期胚胎的心脏发育影响较大,可导致斑马鱼心脏发育延迟及心脏形态异常,并下调斑马鱼心脏发育相关基因BMP2b及HAS2的表达,这可能是叶酸生物学活性受抑后导致心脏发育异常的机制之一.
