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P9基因文献资料
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重症肌无力相关基因P9 TRAF型锌指结构域的表达及抗体制备
目的克隆重症肌无力相关基因P9TRAF型锌指结构域(P9 TRAF-type zinc finger domain,简称P9-ZFD)的cDNA片段及表达其编码的蛋白质,制备P9-ZFD多克隆抗体.方法应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)克隆编码P9-ZFD的cDNA序列,构建pET24a-P9-ZFD表达载体,在E.coli BL21(DE3)宿主菌中胞内诱导表达P9-ZFD蛋白,用经组氨酸亲和层析纯化的P9-ZFD融合蛋白免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体,Western blot鉴定抗体的免疫特异性.结果扩增的P9-ZFD基因片段经测序证实与基因库报道的序列完全一致.表达、纯化的P9-ZFD融合蛋白相对分子质量约30000,其纯度达95%以上.制备的P9-ZFD抗体仅与纯化的P9-ZFD融合蛋白产生特异性免疫反应.结论P9基因TRAF型锌指结构域编码的蛋白质能够在原核细胞中表达,并能获得具有特异免疫反应性的P9-ZFD多克隆抗体.
